[发明专利]胭脂鱼亲子鉴定的方法与试剂盒

权利要求书

1.胭脂鱼亲子鉴定的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤

（1）、胭脂鱼个体DNA提取：提取胭脂鱼亲本和子代DNA备用；

（2）、胭脂鱼微卫星标记的筛选：将69对微卫星标记合成非荧光标记引物之后PCR扩增，初步筛选分离多态性高的的引物进一步进行温度梯度筛选并进行群体分析；

（3）、胭脂鱼微卫星荧光标记的合成和PCR扩增：筛选得到17对多态性高并且能稳定扩增的微卫星标记，分别标上2种荧光引物，然后以每2对引物扩增的PCR产物混合之后读取等位基因值；

（4）、胭脂鱼亲子鉴定技术的建立：挑选一组胭脂鱼个体单独进行受精孵化养殖，提取30个个体DNA作为子代群体，同时选取繁殖亲本10尾用于候选亲本用于建立亲子鉴定体系，进行亲子鉴定分析。

2.根据权利要求1所述的胭脂鱼亲子鉴定的方法，其特征在于：步骤（3）中筛选出的17对胭脂鱼微卫星标记特征为：

。

3.根据权利要求1所述的胭脂鱼亲子鉴定的方法，其特征在于：步骤（2）中69对微卫星PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，最适退火温度下退火45s，72℃延伸1min，共30个循环；之后72℃延伸10min，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的胭脂鱼亲子鉴定的方法，其特征在于：步骤（3）中17对微卫星PCR扩增的反应体系为：10×PCR Buffer 3.0μL；25 mmol/L Mg²⁺0.5μL；dNTPs 1.0μL；Primer 各0.5μL；5 U/μL rTaq Enzyme 0.4μL；1000 ng/μL Template 1.0μL；ddH₂O 18.1μL。

5.根据权利要求1所述的胭脂鱼亲子鉴定的方法，其特征在于：步骤（3）中17对微卫星PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，退火45s，72℃延伸90s，35个循环；72℃再延伸10min4℃保存产物。

6.胭脂鱼亲子鉴定的试剂盒，其特征在于：该试剂盒中药品包括：10mM/L的10×PCR Buffer，25 mmol/L的MgCl₂，10 mM/L的dNTPs，10 mM/L的17个微卫星标记（F.R），5 U/μL的rTaq Enzyme及ddH₂O。