[发明专利]WSB-1蛋白在制备治疗骨肉瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属生物制药领域，涉及一种WSB-1蛋白在制备治疗骨肉瘤药物中的应用。

背景技术

骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一，流行病学研究发现该病好发于15-25岁的青少年，且男性发病率高于女性。骨肉瘤好发部位是长管状骨的干骺端，该肿瘤恶性程度高，预后极差，单纯截肢后患者的5年生存率低于20%，此外该肿瘤的另一个显著特点是肺部转移早，在临床做出骨肉瘤诊断时，其中大部分已经发生肺的微小转移。因此，有效诊断和防治骨肉瘤是目前骨肿瘤研究中的重点和难点。

人WSB-1蛋白是由WSB-1基因（Genebank No.NM 015626.8）编码而来，是WD蛋白亚家族成员之一。人WSB-1蛋白与小鼠和鸡WSB-1蛋白高度同源，由数个WD重复单元和C端的SOCS盒结构域构成。目前该蛋白的功能尚未被完全探明，只清楚该蛋白可降解甲状腺激动的2型碘化甲腺胺酸脱碘酶；在肿瘤方面偶有报道WSB-1蛋白与神经母细胞瘤的预后有一定的关系，但尚无关于WSB-1蛋白在骨肉瘤中的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种WSB-1蛋白在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。该WSB-1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。所述治疗骨肉瘤的药物包括：通过RNA干扰抑制WSB-1基因表达的双链核糖核酸，或用于抑制WSB-1蛋白活性的蛋白质，或用于抑制WSB-1蛋白功能的小分子化合物。

本发明的另一个目的是提供一种WSB-1蛋白在制备诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品中的应用。所述诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品。

其中所述用免疫检测诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品包括：与WSB-1蛋白特异性结合的抗体。

所述用RT-PCR诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品至少包括一对特异性扩增WSB-1基因的引物：正向引物：5’-GATGGTTCATACTTTGCTTGGT-3’（ SEQ ID No：2）；反向引物：5’-CCACTTCAGTATGATCTACCAAG-3’ （ SEQ ID No：3）。 

所述用实时定量PCR诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品至少包括一对特异性扩增WSB-1基因的引物：正向引物：5’-GAATATGGATAAATACACCATGATAC-3’ （ SEQ ID No：4）；反向引物：5’-TAATGCTCCATCAGGAGAAAAGTCA-3’ （ SEQ ID No：5）。 

所述用原位杂交诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品包括：与WSB-1基因的核酸序列杂交的探针：5’-GAATTGATGAGGATTATCCAGTGCAAG-3’ （ SEQ ID No：6）。 

所述用基因芯片诊断骨肉瘤和预测骨肉瘤转移的产品包括：与WSB-1基因的核酸序列杂交的探针：5’-GCTCCAGATGGTTCATACTTTGCTTG-3’ （ SEQ ID No：7）。 

在本发明中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对WSB-1蛋白特异的抗体。例如，将纯化的人WSB-1蛋白或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达人WSB-1蛋白或它的抗原片段的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本发明制备的抗体也可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤技术制备。本发明的抗体包括可以阻抑WSB-1功能的抗体，也可以是不影响人WSB-1蛋白功能的抗体。每一类抗体都可以通过对人WSB-1蛋白的片断或功能域致免疫而产生，而人WSB-1蛋白产物及其片段可以用重组方法产生或用多肽合成仪进行合成。与非修饰形式的WSB-1蛋白结合的抗体，可以利用在原核细胞例如E. coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰形式如糖基化或磷酸化WSB-1蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫细胞中产生的基因产物来免疫动物而得到。

在本发明中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其他衍生物。所述探针的长度没有限制，只要能够完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可以短至25、20、15或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。