[发明专利]针对HPV16E7基因的小干扰RNA及其应用

说明书

本申请是申请日为2011年9月27日、申请号为201110288582.4、发明名称为“针对HPV16E7基因的小干扰RNA及其应用”的发明专利申请的分案申请。 

技术领域

本发明涉及双链核糖核酸(dsRNA)，并涉及其通过RNA干扰(RNAi)作用来预防及治疗人乳头瘤病毒16亚型(HPV16)感染所引起的相关疾病的用途，其中所述疾病例如宫颈癌、外阴癌、食管癌、乳腺癌、肺癌等癌症，以及由HPV16所引起的癌前病变和生殖器疣等疾病。 

背景技术

1998年，Andrew Z.Fire和Craig C.Mello共同发现了体内RNA干扰的作用机制，并于2006年共同获得了诺贝尔生理医学奖。从而为抵抗病毒、癌症等严重疾病的新一代药物(RNA干扰类药物)的研发开启了一扇大门。此RNA干扰类药物具有作用方式新颖、作用机制明确、靶向性强和副作用小等优点。 

人类乳突病毒(Human Papillomavirus，简称HPV)，属于乳多空病毒科乳头瘤病毒属，是一种小型无包膜的病毒颗粒，呈球形，二十面体对称，直径约45-55nm，病毒的核心为双链DNA；病毒衣壳由两种结构蛋白构成的72个壳微粒组成。病毒DNA包含约8000碱基对，其中包括8个早期开放读码框架(E1-E8)、2个晚期读码框架(L1和L2)和1个非编码长控区(LCR)。在早期开放读码框架中，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，单独E7编码的E7蛋白就可以引起宫颈上皮细胞永生化。而晚期读码框L1和L2基因分别编码HPV的主要和次要衣壳蛋白，组装成HPV的衣壳。 

HPV是世界上最流行的性传染疾病源之一，同时也是一类重要的人类肿瘤病毒。目前已经鉴定超过100种HPV病毒的亚型。HPV各型之间有共同抗原，存在于L1蛋白保守区域，这些抗原具有属特异。依其感染的上皮所在部位：分为皮肤上皮型HPV和粘膜上皮型HPV。 

最早确定以及最重要的HPV相关肿瘤是宫颈癌，其发病率仅次于乳腺癌，是严重威胁女性健康的杀手。据统计每年世界范围内约有490,000例左右的新发 病例，其中约130,000发生在中国，每年约有270,000人死于该疾病，约50,000是中国人。随后，更发现外阴癌、食管癌、乳腺癌甚至肺癌等恶性肿瘤的发生、发展都与HPV感染相关。迄今发现的100多种HPV亚型中，高致癌的HPV亚型(即高危型HPV)有10多种，包括HPV16、18、31、58等。目前认为，HPV感染对宫颈癌的发生是必要但非充分的。据研究显示，99.7％宫颈癌患者存在HPV感染。 

已感染HPV的女性初期症状不明显。通过基于对异常宫颈细胞组织学评估的Pap测试以及基于核酸的PCR及杂交技术可以确定HPV的存在并确定HPV亚型。异常宫颈细胞分级为低度鳞状上皮内病变(LSIL)和高度鳞状上皮内病变(HSIL)。其中LSIL包括宫颈上皮内瘤变一级(CIN I)的细胞；HSIL包括宫颈上皮内瘤变二级(CIN II)和三级(CIN III)的细胞。 

目前用于治疗HPV感染的药物及疗法主要有：1、鬼臼树脂(podophyllin)；2、鬼臼毒素podophyllotoxin(podofilox)；3、三氯乙酸(TCA)/二氯乙酸(BCA)；4、冷冻疗法；5、手术切除；6、干扰素(IFN)；7、咪喹莫特hniquimod[1-(2-methylpropyl)-1H-imidazo(4，5-quinolin-4-amine)]；8、5-氟尿嘧啶/肾上腺素；9、无环核苷酸类似物Cidofovir(HPMPC：[5]-1-[3-hydroxy-2-phosphonylmethoxy-propyl]-cytosine)等等。然而，临床上应用的这些抗病毒以及其它抗肿瘤类药物的不但特异性不强，而且副作用大。目前世界上没有一种特异、高效的抑制HPV的药物来降低甚至抑制其相关癌症的发生和发展。 

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了通过小干扰核酸分子抑制引起细胞良性和恶性增生的HPV E7基因表达，来预防和治疗HPV16感染相关疾病的解决方案。