[发明专利]从毛蚶中提取甾体化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从毛蚶中提取甾体化合物的方法，属于海洋天然产物化学领域。

背景技术

毛蚶(Scapharca subcrenata)，又名“毛蛤、麻蛤”，是软体动物门瓣鳃纲蚶目蚶科，分布于中国、朝鲜和日本沿海，以中国渤海和东海近海较多。毛蚶的营养与药用价值较高，有化痰、软坚、散瘀、消积等功效，可治痰积、胃痛、嘈杂、吐酸、瘢瘕、瘰疬、牙疳等病症，现广泛应用于临床治疗胃及十二指肠溃疡，《神农本草经》及历代主要本草中均有药用记载，民间用于抗肿瘤、抗贫血和抗炎等。毛蚶已被证明含有许多生命活性物质，如从中提取牛磺酸，对乙醇性肝损伤有保护作用；抗癌肽类，具有很高的抗癌活性。因此合理利用海洋资源，从中提取活性物质的研究具有重要意义。

从检索的文献看，国内何瓷绵等研究了毛蚶多糖的提取方法，并对其免疫增强活性进行了分析；李谦等对毛蚶提取物的化学成分进行了定量分析，结果表明提取物富含蛋白质和多糖，营养价值较高；窦昌贵等研究了毛蚶水解液的生物学活性，实验证实了该产物对小鼠实验性肝损伤具有显著的保护作用，表明毛蚶水解液具有降血糖、降血脂作用；陈守国等在申请的专利中［CN1857717A］报道，毛蚶提取物具有显著的抗肿瘤活性；申请公布号CN101037469，名称是从毛蚶中提取小分子活性多肽的方法，公开了从毛蚶中提取小分子多肽的方法，并认为毛蚶小分子多肽具有明显的抑制肿瘤作用。这些研究多集中在活性多糖、多肽及蛋白质等方面，迄今尚未见有从毛蚶中提取甾体化合物的技术披露。众所周知甾体类化合物是自然界中一类常见的天然化学成分，是生产激素药物的重要原料，但是其抗虫活性研究很少，因此从毛蚶中提取甾体化合物给毛蚶的药用研究及开发提供了一项依据，将会拓宽毛蚶的药用领域，这就是本申请的意义所在。

发明内容

本发明的目的在于提供从毛蚶中提取甾体化合物的方法，克服现有对毛蚶的药用利用研究中只针对活性多糖、多肽及蛋白质的局限性，拓宽毛蚶的药用领域，为毛蚶的药用研究及开发提供新的依据。

为实现上述目的，本发明采取了下述技术方案：从毛蚶中提取甾体化合物的方法，主要技术步骤是：

（1）从毛蚶中提取醇溶性提取物：取鲜毛蚶洗净、去壳、取肉，于组织捣碎机中匀浆，于毛蚶浆中加入毛蚶浆体积1-2倍量的90-95%乙醇，在室温或4℃状态下，采用超声提取、微波提取、冷浸、渗漉、高压提取或回流提取的方式，提取1-4次，每次2-24小时，收集合并提取液，过滤，滤液用100–300hPa大气压减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到毛蚶浸膏备用；

（2）制备毛蚶萃取物：于毛蚶浸膏中以1：6.8-7.2的重量比加入水并充分混悬，然后分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到三种萃取液，三种萃取液分别经100–300hPa大气压减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，分别得到石油醚相，乙酸乙酯相、正丁醇相和水相备用；

（3）毛蚶甾体化合物提取：将正丁醇相用甲醇以1：1的体积比溶解，先用Sephadax LH-20凝胶柱层析，氯仿/甲醇1︰1洗脱，点板合并馏分，然后经40℃、100–300hPa大气压减压浓缩至干，将凝胶显红色馏分用2-3ml甲醇溶解，然后再用RP-18反相硅胶柱层析，甲醇水30%、50%、70%、90%和100%梯度洗脱，最后用高效液相，90%甲醇水洗脱，得到3个纯化合物；

（4）对三个纯化合物的理化性质和波谱数据进行分析：化合物的物理常数和波谱数据为：