[发明专利]一种结核杆菌三抗原融合基因疫苗及其制备方法和应用有效

申请号：	201310217256.3	申请日：	2013-06-03
公开（公告）号：	CN103266119A	公开（公告）日：	2013-08-28
发明（设计）人：	熊思东;徐薇;董春升;岳艳;孔红梅	申请（专利权）人：	苏州大学
主分类号：	C12N15/62	分类号：	C12N15/62;C07K19/00;C12N15/66;A61K48/00;A61P31/06
代理公司：	上海世贸专利代理有限责任公司 31128	代理人：	严新德
地址：	215006***	国省代码：	江苏;32
权利要求书：	查看更多	说明书：	查看更多
摘要：
搜索关键词：	一种结核杆菌抗原融合基因疫苗及其制备方法应用
钻瓜网技术展会专利词库专利权人专利榜在售专利公布日期热门专利

【权利要求书】：

1.一种融合蛋白基因，其特征在于：由抗原基因Rv3615c、抗原基因Mtb10.4和抗原基因Rv2660c从5’端到3’端依次串联连接而成。

2.如权利要求1所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：在所述的抗原基因Rv2660c的3’端连接一个Flag标签。

3.如权利要求2所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：所述的Flag标签的基因序列为DYKDDDDK。

4.如权利要求1所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：所述的融合基因的碱基序列如SEQ ID NO：7所示。

5.一种权利要求1所述的融合蛋白基因编码的蛋白质。

6.如权利要求5所述的一种蛋白质，其特征在于：所述的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

7.如权利要求1所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Rv3615c的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

8.如权利要求1所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Mtb10.4的基因序列如SEQ ID NO：2所示。

9.如权利要求1所述的一种融合蛋白基因，其特征在于：所述的抗原Rv2660c的基因序列如SEQ ID NO：3所示。

10.一种结核杆菌三抗原融合基因疫苗，由一个载体构成，在所述的载体中插入有一段外源融合目的基因，其特征在于：所述的外源目的基因为权利要求1所述的融合蛋白基因。

11.如权利要求10所述的一种结核杆菌三抗原融合基因疫苗，其特征在于：所述的载体为真核表达质粒。

12.权利要求10所述的结核杆菌三抗原融合基因疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)提取结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA作为模板，通过PCR方法扩增蛋白抗原Rv3615c片段，Mtb10.4片段和Rv2660c片段的编码基因；

所述抗原Rv3615c片段的双链DNA的序列为：

atgacggaaa acttgaccgt ccagcccgag cgtctcggtg tactggcgtc gcaccatgac

tactgccttt tgaactggca ggtcgggctc gcagagccac atgaccgcag cgtggtactg

aacgcggcgg tcgatgcctc ctcgggcgtc gaagctgccg ctggcctagg cgaatctgtg

ttgcgccgcc agctacggag gagcccgcag cttcgacggc gaccggatcc gcttagacac

gcgatcactc acggtccgta ctgctcacag ttcaacgaca cgttaaatgt gtacttgact

cgctagtgag tgccaggcat gacgagtgtc aagttgctgt gcaatttaca catgaactga

gcccacaatg ccctgggctc gtccttgcat acggccggtg tcgatctcgc caaaagtctt

cgggtgttac gggacccgag caggaacgta tgccggccac agctagagcg gttttcagaa

cgaattgcgg cgaagatata tagcgaggcc gacgaagcgt ggcgcaaggc tatcgacggg

gcttaacgcc gcttctatat atcgctccgg ctgcttcgca ccgcgttccg atagctgccc

ttgtttacct ga

aacaaatgga ct

所述抗原Mtb10.4片段的双链DNA的序列为

atgtcgcaaa tcatgtacaa ctaccccgcg atgttgggtc acgccgggga tatggccgga

tacagcgttt agtacatgtt gatggggcgc tacaacccag tgcggcccct ataccggcct

tatgccggca cgctgcagag cttgggtgcc gagatcgccg tggagcaggc cgcgttgcag

atacggccgt gcgacgtctc gaacccacgg ctctagcggc acctcgtccg gcgcaacgtc

agtgcgtggc agggcgatac cgggatcacg tatcaggcgt ggcaggcaca gtggaaccag

tcacgcaccg tcccgctatg gccctagtgc atagtccgca ccgtccgtgt caccttggtc

gccatggaag atttggtgcg ggcctatcat gcgatgtcca gcacccatga agccaacacc

cggtaccttc taaaccacgc ccggatagta cgctacaggt cgtgggtact tcggttgtgg

atggcgatga tggcccgcga cacggccgaa gccgccaaat ggggcggcta g

taccgctact accgggcgct gtgccggctt cggcggttta ccccgccgat c

所述抗原Rv2660c片段的双链DNA的序列为：

gtgatagcgg gcgtcgacca ggcgcttgca gcaacaggcc aggctagcca gcgggcggca

cactatcgcc cgcagctggt ccgcgaacgt cgttgtccgg tccgatcggt cgcccgccgt

ggcgcatctg gtggggtcac cgtcggtgtc ggcgtgggca cggaacagag gaacctttcg

ccgcgtagac caccccagtg gcagccacag ccgcacccgt gccttgtctc cttggaaagc

gtggttgcac cgagtcagtt cacatttagt tcacgcagcc cagattttgt ggatgaaacc

caccaacgtg gctcagtcaa gtgtaaatca agtgcgtcgg gtctaaaaca cctactttgg

gcaggtcaat cgtggtgcgc gatactggga ttgaaccagt ttcactag

cgtccagtta gcaccacgcg ctatgaccct aacttggtca aagtgatc

2)以上述扩增的抗原Rv3615c，Mtb10.4和Rv2660c片段作为模板，通过另外设计的三对引物，经OverPCR的方法扩增抗原Rv3615c，Mtb10.4和Rv2660c片段，获得的三抗原融合蛋白基因，所述三抗原融合基因的双链DNA的序列为：