[发明专利]一种医用级生物材料用鱼皮胶原的制备方法

权利要求书

1.一种医用级生物材料用鱼皮胶原的制备方法，其特征在于，所述鱼皮胶原按照以下步骤进行：

1）原料处理：将清洗干净并脱水后的海鱼或淡水鱼的鱼皮绞碎成0.5～5cm²的小块后，加入料液比1:30（w/w）的2～5%NaCl盐溶液，0～4℃搅拌8～12小时后排除废液，并重复3～4次，用去离子水清洗，将清洗后的鱼皮以料液比1:30（w/w）放入0.05～0.2M NaOH溶液中搅拌32～48小时，每间隔8～12小时更换所述NaOH溶液一次，再用去离子水充分清洗经碱溶液处理后的鱼皮直至中性；

2）胶原提取：将清洗后的鱼皮以料液比1:10～30（w/w）的比例放入0.2～1M的酸性溶液中捣碎，搅拌4～8小时后离心，取上清液得酸溶性胶原液，并重复2～3次，合并离心后的上清液并加入0.1%～1%的蛋白酶搅拌24～60小时，酶化处理得酶解胶原液；

3）提取物纯化：加入饱和的NaCl溶液，直至所述胶原液中的盐含量达到2～5%，静置2～6小时后离心，获取沉淀粗胶原蛋白，将所述粗胶原蛋白以料液比1:5～10（w/w）溶解在纯水中，用半透膜透析4～6次，纯化胶原液并用-60℃进行冷冻干燥处理，获得水分≤14%的医用级生物材料用天然高分子鱼皮胶原。

2.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤1）中采用的鱼皮为新鲜或冷冻的各类海鱼或淡水鱼鱼皮。

3.如权利要求2所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述海鱼鱼皮为鳕鱼鱼皮、鲽鱼鱼皮、鱿鱼鱼皮、马哈鱼皮，淡水鱼皮为罗非鱼鱼皮、青鱼鱼皮、草鱼鱼皮、鲢鱼鱼皮、鳙鱼鱼皮。

4.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤1）中清洗鱼皮的步骤为:将去除鱼鳞、残肉及脂肪等杂物的新鲜的或冷冻的海鱼或淡水鱼的鱼皮以料液比1：20～30（w/w）0～4℃的纯水进行搅拌，清洗30分钟后排除废水并重复一次。

5.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤1）中处理所述鱼皮至中性的步骤为：用去离子水漂洗4次，每次0.5～1小时，至pH7～8。

6.如权利要求1或5所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤1）中的去离子水温度为0～4℃，鱼皮与所述去离子水的料液比为1:30（w/w）。

7.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤2）中的酸性溶液为乙酸、磷酸或柠檬酸溶液。

8.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤2）中的蛋白酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶或碱性蛋白酶。

9.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述步骤3）中所述半透膜透析的步骤为：用半透膜截留分子量100KD，透析外液为0～4℃料液比1:20～40（w/w）的纯水，每8～12小时更换所述透析液一次，重复4～6次。

10.如权利要求1所述的鱼皮胶原制备方法，其特征在于，所述鱼皮胶原的制备步骤均在0～4℃的条件下进行。