[发明专利]一种测定养血清脑有效成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种测定养血清脑有效成分的方法。 

背景技术

养血清脑颗粒是天士力集团根据中医药传统理论,采用最新的工艺独家研制生产的现代中药,1999年获国家新药发明专利,对慢性脑供血不足(CCCI)及其他原因引起的头晕、头痛、失眠、健忘等有显著疗效，现已成为天士力集团的重点产品。养血清脑颗粒的配方描述在一种治疗头痛的中药、专利号为931000505的发明专利中，其组成包括，当归4-9%，川穹4-9%，白芍2-8%，熟地2-8%，勾藤10一15%，鸡血藤10-15%，夏枯草10一15%，决明子10一15%，珍珠母10-15%，元胡4-9%，细辛0.5-2%。养血清脑颗粒已经列入国家药品标准，标准号为WS3-258(Z一036)-2001(Z)。 

上述配方，根据临床需要也可以制备成片剂，胶囊，口服液等剂型，疗效相同。由于中药物质基础复杂，之前并没有人进行过养血清脑中主要化学成分的药动学实验，因此需要开发一个特异性好、灵敏度高、定量准确的含量测定方法来测定血浆中有效物质的含量。本实验采用液质联用仪器，建立了一种能够同时测定养血清脑中6种有效成分原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、芍药苷的血药浓度测定方法，而且该方法专属性好、灵敏度高、精密度、准确度、提取回收率和稳定性等均达到体内药物分析的要求，之后又利用该方法对6种有效成分在大鼠体内的药动学特征进行了考察。 

发明内容

本发明提供一种测定养血清脑有效成分的方法，该方法可用于服药后有效成分的血药浓度的测定，有利于对服用该药物后进行有效成分的吸收利用相关的药物测定。 

本发明所述方法是针对养血清脑制剂的，所述制剂包括养血清脑颗粒，也包括用上述配方制备的养血清脑片剂，胶囊，口服液等剂型。养血清脑制剂中包括多种 有效成分，目前已知的有效成分包括原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、芍药苷等，本发明根据临床需要，研究出一种同时测定血浆中上述6种有效成分的方法，本发明所述方法，采用液质联用法，所述方法的详细描述如下： 

（1）样品处理：取血浆样品（给包括人在内的动物服用养血清脑制剂，一定时间后，取血，分离得到血浆）1-3体积，加入0.2-2体积酸溶液和0.2-1体积内标溶液（配制方法如下：精密称定氯霉素1.0mg置于10Ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得储备液，取储备液适量并用甲醇稀释至所需浓度），涡旋混合；之后加入10-50体积有机溶剂涡旋混合进行液液萃取；上述混合液离心后取有机溶剂层，吹干，然后用1-2体积液相流动相复溶后离心，取上清液进样测定，其中流动相含50%-90%A相，其余为B相； 

（2）采用液质联用仪进行测定： 

其中液相部分色谱条件：采用反相c18或c8硅胶色谱柱作为分离介质，进样后梯度洗脱，其中，流动相A0.02-5%(甲酸或乙酸)水，B乙腈或甲醇；梯度洗脱条件：0-2.5min(10%B、90%A)；2.51-5min(100%B)；5.1-20min(10%B、90%A)；流速；0.1-0.4ml/min；柱温15-40℃； 

质谱检测条件：负离子检测模式；喷雾电压：-2500—-3500v；毛细管温度：250-400℃；鞘气：N2（5-25psi）；辅助气：N2（1-15arb）；碰撞气体压力：Ar1.5mTorr；扫描时间：0.1-1s； 

采用选择反应监测模式（SRM）： 

原儿茶酸离子对m/z153→109或153→91CE=10-30v; 

绿原酸m/z353→191或353→85CE=10-40v; 

咖啡酸m/z179→135或179→108CE=10-45v； 

阿魏酸m/z193→134或193→178CE=5-30v； 

迷迭香酸m/z359→161或359→197或133CE=10-50V； 

芍药苷m/z525→449或525→121CE=10-30V； 

氯霉素m/z321→152CE=10-40V。 

以上检测方法，其中，步骤1中所述的酸溶液选自，盐酸，0.1-10%的甲酸或0.01-0.2%的磷酸。优选1%的甲酸或0.05%的磷酸。步骤1中所述的内标溶液是： 

丹参素、酮洛芬、氯霉素、弗比洛芬中的一种。 

步骤2中所述的有机溶剂为：乙酸乙酯，二氯甲烷或3：1体积比的三氯甲烷与正己烷的混合溶剂。