[发明专利]一组用于检测斑茅多态性的引物组、检测方法和用途无效
申请号: | 201310219086.2 | 申请日: | 2013-06-04 |
公开(公告)号: | CN103468790A | 公开(公告)日: | 2013-12-25 |
发明(设计)人: | 鄢家俊;张建波;白史且;张劲;刀志学;常丹;张昌兵 | 申请(专利权)人: | 四川省草原科学研究院;贵州省草业研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 龚燮英 |
地址: | 611731 四川省*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一组 用于 检测 多态性 引物 方法 用途 | ||
1.一组SSR引物组,其特征在于,所述引物组包括核苷酸序列SEQ ID NO:1-30所示引物。
2.如权利要求1所述SSR引物组在检测斑茅多态性中的应用。
3.如权利要求1所述的SSR引物组的设计方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
A、提取待测斑茅样品基因组DNA;
B、用酶切基因组DNA,回收并纯化,回收的产物用接头连接;
C、将连有接头的DNA片段作为模版进行扩增;
D、将步骤C中扩增产物与生物素探针进行杂交,同时用磁珠对杂交产物进行富集,构建SSR富集文库;
E、将步骤D中产物连接到载体上转入到大肠杆菌感受态细胞中,挑取阳性克隆进行DNA测序分析;
F、利用微卫星DNA位点查找软件对阳性克隆进行搜索,筛选出含微卫星的序列,然后用引物分析软件在微卫星两翼设计引物;
G、用不同斑茅材料对开发的SSR引物进行多态性验证。
4.如权利3所述的SSR引物组的设计方法,其特征在于,步骤B中采用内切酶。
5.如权利3所述的SSR引物组的设计方法,其特征在于,步骤B中酶切后进行纯化,并用接头连接。
6.如权利3所述的SSR引物组的设计方法,其特征在于,步骤C中预扩增后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
7.如权利3所述的SSR引物组的设计方法,其特征在于,步骤D的杂交过程中平衡磁珠,在杂交产物中加入处理好的磁珠温育,然后用磁力柱吸附,洗涤,加入TBST洗脱磁珠,留上清液,沉降DNA,对富集产物进行扩增。
8.如权利要求1所述的SSR引物组用于检测斑茅多态性的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:提取斑茅DNA,用所述的SSR引物对斑茅DNA进行PCR扩增,扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,电泳完成后银染,再用高分辨率数码相机拍照保存。
9.一种检测斑茅多态性的试剂盒,其特征在于,包含如权利要求1所述的引物组。
10.如权利要求9所述的试剂盒检测斑茅多态性的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:提取斑茅DNA,用所述的试剂盒对斑茅DNA进行PCR扩增,扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,电泳完成后银染,再用高分辨率数码相机拍照保存。
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