[发明专利]直读便携式血糖仪测定生物标志物及DNA含量的方法

权利要求书

1.用直读便携式血糖仪测定生物标志物及DNA含量的方法，其特征在于：采用包埋葡萄糖分子的载体脂质体、金属空心球、多孔碳球、多孔硅球或聚合物球作为复合标记物，通过夹心免疫反应或者DNA反应引入到传感器表面，将生物标志物或者DNA检测转化为检测最终产物葡萄糖，根据夹心免疫分析原理，待测生物标志物及DNA的含量与被包埋的葡萄糖含量成正比，通过血糖仪检测葡萄糖的浓度即得到生物标志物及DNA的含量。

2.根据权利要求1所述的用直读便携式血糖仪测定生物标志物及DNA含量的方法，其特征在于：测定磷化p53蛋白p53¹⁵步骤如下：

（1）免疫反应：在9个0.5mL塑料离心管中分别加入100μL磁性纳米复合物Fe₃O₄-p53¹⁵Ab₁，然后在上述9个离心管中分别加入100μL浓度为0.2ng/mL，0.5ng/mL，1ng/mL，2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL的p53¹⁵，孵化50分钟后，磁性分离；用磷酸缓冲溶液洗涤2次以上后，再分别加入100μL脂质体复合标记物p53¹⁵Ab₂-liposome，孵化40分钟，磁性分离；

（2）测定：向离心管中加入10μL10mg/mLTritonX-100，使葡萄糖分子从被俘获的脂质体的内腔中释放出来；然后磁分离移走免疫复合物，取20μL上层清液滴在血糖仪的试纸条上，直接读出血糖仪的示数，即为转化成样品中p53¹⁵的含量。

3.根据权利要求2所述的用直读便携式血糖仪测定生物标志物及DNA的方法，其特征在于步骤（1）中所用的Fe₃O₄-p53¹⁵Ab₁的制备方法：

1）、200μL5.0mg/mL羧基化的磁性纳米颗粒Fe₃O₄-COOH，分散在1.0mL含有400mM1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和100mMN-羟基琥珀酰亚胺的pH5.2磺基脂肪酸甲酯钠盐缓冲溶液中，活化30min后磁分离，并用磷酸缓冲溶液多次洗涤除去过量的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺；

2）、将Fe₃O₄-COOH分散在1.0mL20μg/mLp53¹⁵Ab₁中反应12h，磁分离后用磷酸缓冲溶液洗涤3次，将所得到的磁性纳米复合物Fe₃O₄-p53¹⁵Ab₁分散在含有1%牛血清蛋白的磷酸缓冲溶液中，保存于4°C备用即可。