[发明专利]富集分离白色假丝酵母的新方法

权利要求书

1.富集分离白色假丝酵母的新方法，其特征在于包括以下步骤：(1) 称取1 mg多臂井星聚合物，悬浮于4 mL0.01 mol/L pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液 545 μL，使戊二醛的终浓度为3%；在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；向上述溶液加入0.75 mg白色假丝酵母特异性抗体，以150 r/min 的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得多臂井星聚合物-抗体复合物；（2）称取15 mg 长链生物素，悬浮于4 mL 0.01 mol/L pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌，滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；加入2.65 mg多臂井星聚合物-抗体复合物，在摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-多臂井星聚合物-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品溶液，加入0.1 mg白色假丝酵母抗体和长链生物素共修饰的多臂井星聚合物即步骤（2）长链生物素-多臂井星聚合物-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁力分离后，用0.1%PBST洗涤，用PBS缓冲液重悬即得捕获有白色假丝酵母的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-多臂井星聚合物-抗体-白色假丝酵母抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述多臂井星聚合物为多臂井星化聚酰胺-胺，其分子量为70000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰了链霉亲和素的纳米磁珠粒径为20-50 nm，优选为30 nm。