[发明专利]人外周血中造血干细胞的分离方法

权利要求书

1.人外周血中造血干细胞的分离方法，其特征在于包括以下步骤：（1）称取1.0 mg树状超支聚合物，悬浮于4 mL 0.01 mol/L pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；滴加1mL 2.7 mg/mL鼠抗人造血干细胞单克隆抗体溶液，使其终浓度达到3 mg/mL左右，摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得树状超支聚合物-抗体复合物；（2）取27.6 mg长链生物素，悬浮于4 mL 0.01 mol/L pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；加入1.0 mg树状超支聚合物-抗体复合物，在摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-树状超支聚合物-抗体复合物；（3）每取1 mL正常人新鲜外周血，加入0.2 mg抗体和长链生物素共修饰的树状超支聚合物即步骤（2）长链生物素-树状超支聚合物-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速再室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁力分离后，去离子水轻轻清洗后，用PBS缓冲液重悬即得富集有造血干细胞的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-树状超支聚合物-抗体-造血干细胞复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述树状超支聚合物为氨基化的树状超支化聚酰胺-胺，其分子量为 56000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纳米磁珠粒径为20-50nm，优选为30 nm。