[发明专利]α-1-抗胰蛋白酶和载脂蛋白A-I的纯化方法

权利要求书

1.一种方法，其用于将载脂蛋白A-I（ApoA-I）和α-1-抗胰蛋白酶（AAT）从含有这两种蛋白的单一起始人血浆部分中纯化出来，该方法包括：

i)对包括ApoA-I以及AAT的起始人血浆部分进行处理，以便将含有ApoA-I的部分与含有AAT的部分分开；

ii)从含有ApoA-I的部分将ApoA-I纯化到药物级纯度；并且

iii)从含有AAT的部分将AAT纯化到药物级纯度；

其中该方法包括：

a)对于被用作起始材料的人血浆部分进行处理，使得ApoA-I以及AAT二者均被溶解；

b)在ApoA-I和AAT都不与气相白炭黑结合的条件下，添加二硫苏糖醇以及气相白炭黑；

c)将含有AAT和ApoA-I的溶液从该气相白炭黑分离，以制造含有AAT和ApoA-I的上清液；

d)通过离子交换层析法将AAT和ApoA-I从某些其它蛋白中分离；

e)通过疏水作用层析法将AAT从ApoA-I分离；并且

f)在一个或多个处理步骤中分别将ApoA-I以及AAT纯化至药物级纯度。

2.一种方法，其用于将载脂蛋白A-I（ApoA-I）和α-1-抗胰蛋白酶（AAT）从含有这两种蛋白的单一起始人血浆部分中纯化出来，该方法包括：

i)对包括ApoA-I以及AAT的起始人血浆部分进行处理，以便将含有ApoA-I的部分与含有AAT的部分分开；

ii)从含有ApoA-I的部分将ApoA-I纯化到药物级纯度；并且

iii)从含有AAT的部分将AAT纯化到药物级纯度；

其中该方法包括：

a)对起始材料进行处理这样使得ApoA-I以及AAT二者均被溶解；

b)在ApoA-I和AAT都不与离子交换柱结合的条件下，使溶解的ApoA-I以及AAT穿过阴离子交换柱，来形成含有ApoA-I和AAT的流穿液；

c)使含有ApoA-I以及AAT的流穿液与疏水作用层析基质相接触，其条件为使得ApoA-I结合而AAT保持可溶；

d)将可溶的AAT从该疏水作用层析基质中分离；

e)将ApoA-I从该疏水作用层析基质上洗脱；并且

f)在一个或多个处理步骤中分别将ApoA-I以及AAT纯化至药物级纯度。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述方法用于大规模纯化。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其中起始人血浆部分选自：Cohn部分IV中的一种或多种、来自Kistler-Nitschmann上清液A和A+I的沉淀、和硫酸铵沉淀。

5.如权利要求4所述的方法，其中该一种或多种Cohn部分IV是Cohn部分IV₁。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于13.69或以上的pH。

7.如权利要求6所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于13或以上的pH。

8.如权利要求7所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于12或以上的pH。

9.如权利要求8所述的方法，其中AAT和ApoA-I未暴露于11或以上的pH。

10.如权利要求2所述的方法，其中在该阴离子交换步骤之前将这些条件设置为大约7.1至7.7的pH以及在大约22°C、大约15mS/cm的电导率。

11.如权利要求2所述的方法，其中施加在疏水作用层析基质上的ApoA-I以及AAT的溶液包括0.9M至1.1M硫酸铵。

12.如前述权利要求中的任一项所述的方法，进一步包括减少病毒的步骤。

13.如权利要求12所述的方法，其中减少病毒的步骤包括在大约60°C的巴斯德杀菌处理。

14.如权利要求13所述的方法，其中巴斯德杀菌步骤是在包括至少40%w/w的蔗糖以及至少4%w/w的乙酸钾的溶液中进行的。

15.如权利要求14所述的方法，其中该减少病毒的步骤包括通过可以除去病毒颗粒的过滤器的过滤处理。