[发明专利]施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体及其制备方法有效
| 申请号： | 201310221585.5 | 申请日： | 2013-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN103275219A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 张永宁;吴绍强;林祥梅;吕继洲;王彩霞;邓俊花;袁向芬;景宏丽 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;G01N33/577;C12N5/20;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 100123 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 施马伦贝格 病毒 核衣壳 蛋白 单克隆抗体 及其 制备 方法 | ||
1.施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体，其特征在于，其是由保藏号为CGMCC No.7617的杂交瘤细胞SBV-N McAb2C8分泌产生的。
2.一种制备施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取施马伦贝格病毒基因组RNA，经RT-PCR扩增获得N基因序列，并插入到原核表达载体中，转化大肠杆菌，进行诱导表达以及蛋白纯化；将纯化蛋白作为抗原免疫动物，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，经筛选获得可稳定分泌抗施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，然后通过体内或体外的方法制备单抗。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，进行RT-PCR扩增所使用的引物为：
上游引物：5’-CGCGAATTCATGTCAAGCCAATTCATTTTTGAA-3’，
下游引物：5’-TTACTCGAGGATGTTGATACCGAATTGCTGCAAG-3’。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，免疫的动物为BALB/c小鼠，使用的小鼠骨髓瘤细胞为SP2/0细胞。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，使用的原核表达载体为pET-28a。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述体内方法为：将可稳定分泌抗施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞腹腔注射动物，采集腹水，分离纯化单抗。
7.含有权利要求1所述单克隆抗体的用于检测施马伦贝格病毒的试剂盒。
8.杂交瘤细胞SBV-N McAb2C8，其保藏号为CGMCC No.7617。
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