[发明专利]肌肽分子印迹聚合物、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品技术领域，具体来说涉及一种肌肽分子印迹聚合物、该肌肽分子印迹聚合物的制备方法，及在分离富集生物和食品样品中肌肽方面的应用。 

背景技术

肌肽（L-carnosine）是一种天然二肽，极性很强，只溶于水不溶于任何有机溶剂，存在于脊椎动物的骨骼肌和大脑等组织中，其化学本质是由β-丙氨酰和组氨酸通过肌肽合成酶的作用而形成的。肌肽的含量约为 (116～2016)umol/g，在猪肉、牛肉和鸡肉中的含量分别为418mmol、210 mmol和1510mmol，在人体肌肉中的含量为2～20mmol。在同一种动物不同部位肌肽含量不一样，如禽类中：胸肌比腿肌中含量高，鸡肉比鸭肉中含量高。 

由于肌肽易溶于水，在牛肉浸提液及工业废弃的牛肉预煮液中都含有大量肌肽。因此，从样液及牛肉预煮液中富集和浓缩肌肽能够带来很高的经济价值。目前所采用的分离材料较多的C18、弗罗里硅土及氧化铝等填料只能分离性质及结构相差较大的物质，对结构相似物缺乏专一性识别，严重干扰分离结果的准确性。 

分子印迹技术可使聚合物结构中形成对模板分子具有特殊性的结合位点及孔穴。在由自由基引发的聚合过程中，模板分子和功能单体形成聚合物，在洗去模板分子后，聚合物内部留下对模板分子具有特异性结合能力的位点及孔穴。 

分子印迹聚合物（MIPs）具有立体构型和作用位点的双重识别能力，是一种优良的吸附材料。分子印迹固相萃取不仅可以成为仪器分析的前处理方法，而且还能够对有营养价值和经济价值的功能性成分起到分离富集的作用。这些优势是普通色谱填料无法比拟的。关于肌肽的分离主要还是停留在分析检测阶段，对于它的分离富集未见报道。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种对肌肽具有专一性识别性能、可以对环境、生物样品和食品样品中的肌肽进行分离提纯的肌肽分子印迹聚合物。 

本发明的另一目的在于提供该肌肽分子印迹聚合物的制备方法。 

本发明的再一目的在于该肌肽分子印迹聚合物在分离富集生物和食品样品中肌肽方面的用途。 

本发明的目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：本发明的肌肽分子印迹聚合物，由下述方法制得：将模板分子肌肽20～25μmol、甲基丙烯酸功能单体110～550μmol与1～2mL水-乙腈混合体系进行超声波处理混合，冲入氮气密封，0～4℃下充分反应10～14小时，然后将上述混合物加入交联剂乙二醇双甲基丙烯酸酯660～2420μmol、引发剂偶氮二异丁腈0.1～0.3mmol，混合均匀后冲入氮气3～6min密封，在容器中，0～4℃环境下，采用30W～250W紫外灯在24小时之内进行本体聚合；将聚合反应后的聚合物从反应容器中取出，用研钵研磨后过80目标准筛，得到70～85μm粒径的分子印迹聚合物微球；用丙酮溶解精细颗粒并将其去除，然后用超纯水清洗聚合物，将模板分子肌肽去除掉，经冷冻真空干燥得到肌肽分子印迹聚合物颗粒；再经冷冻真空干燥得到纯净的肌肽分子印迹聚合物颗粒。 

本发明的一种肌肽分子印迹聚合物的制备方法，包括下述步骤： 

（1）聚合：将模板分子肌肽20～25μmol、甲基丙烯酸功能单体110～550μmol与1～2mL水-乙腈混合体系进行超声波处理混合，冲入氮气密封， 0-4℃下充分反应10～14小时，然后将上述混合物加入交联剂乙二醇双甲基丙烯酸酯660～2420μmol、引发剂偶氮二异丁腈0.1～0.3mmol，混合均匀后冲入氮气3～6min密封，在容器中，0-4℃环境下，采用30W～250W紫外灯照射12～24小时进行本体聚合；

（2）研磨：将聚合反应后的聚合物从反应容器中取出，用研钵研磨后过80目标准筛，得到70～85μm粒径的分子印迹聚合物微球；

（3）洗脱：用丙酮溶解精细颗粒并将其去除，然后用超纯水清洗聚合物，将模板分子肌肽去除掉，经冷冻真空干燥得到肌肽分子印迹聚合物颗粒；

（4）再经冷冻真空干燥得到纯净的肌肽分子印迹聚合物颗粒。

上述的一种肌肽分子印迹聚合物的制备方法，其中：洗脱的方法为用200～300mL丙酮去除掉未反应的功能单体丙烯酸、交联剂乙二醇双甲基丙烯酸酯及一些精细粒子，倾倒出去，然后加入500～600mL超纯水萃取模板分子，反复萃取，直到萃取液中不再检测出肌肽为止。 

本发明的肌肽分子印迹聚合物分离富集生物和食品中肌肽的方法，包括：