[发明专利]一种固定化脂肪酶及其制备方法和应用

权利要求书

1. 一种固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）载体制备

利用硅烷偶联剂对预处理后的介孔TiO₂进行表面疏水改性；

（2）脂肪酶的固定化

在表面改性后的介孔TiO₂中加入脂肪酶溶液，搅拌吸附，离心，将沉淀用磷酸缓冲液洗涤直至无蛋白检出，冷冻干燥，得到固定化脂肪酶。

2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述介孔TiO₂进行表面改性的具体方法为：取预处理后的介孔TiO₂，加入甲苯，预热5~20min, 再加入硅烷偶联剂，在N₂保护下，30~90℃搅拌，回流反应1~24h，离心弃上清，将沉淀用甲苯、丙酮、无水乙醇依次分别洗涤后，真空干燥得表面改性的介孔TiO₂。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理的介孔TiO₂与甲苯的质量体积比按g/mL计为1:100~500；优选范围为1:100~300，最优配比为1:200； 

所述预处理的介孔TiO₂与硅烷偶联剂的质量摩尔比以g/mmol计为10~1:1，优选为2:1。

4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述介孔TiO₂预处理的具体方法为：向介孔TiO₂中加入混合溶液，50~90℃搅拌回流1~5 h，离心弃上清，沉淀用蒸馏水洗涤至pH值中性，真空干燥，得预处理后的介孔TiO₂；

所述混合溶液由浓硫酸与30%过氧化氢按体积比9~1：1组成；

所述介孔TiO₂与混合溶液的质量体积比以g/mL计为1:10~100。

5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂选自3-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-（2,3-环氧丙氧基）丙基三甲氧基硅烷、3-（2-氨乙基）-氨丙基三甲氧基硅烷、十六烷基三甲氧基硅烷、或者3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷中的一种或两种以上；

优选的硅烷偶联剂是3-氨丙基三乙氧基硅烷或者3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷；

最优选的硅烷偶联剂是3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷。

6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述表面改性的介孔TiO₂与脂肪酶溶液的质量体积比以g/mL计为1: 5~50；所述脂肪酶溶液的蛋白含量在0.05-5 mg/mL之间。

7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）在表面改性后的介孔TiO₂中加入脂肪酶溶液，在20~50℃下搅拌吸附反应3~36h，离心，将沉淀用磷酸缓冲液洗涤直至无蛋白检出，冷冻干燥，得到固定化脂肪酶。

8. 一种权利要求1-7所述制备方法得到的固定化脂肪酶。

9. 权利要求8所述的固定化脂肪酶在水相中催化水解反应、在有机相中催化酯化反应、转酯反应和/或手性拆分中的应用。