[发明专利]一种疏枝刺柳珊瑚激光拉曼光谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于柳珊瑚鉴定领域，具体地说设计到一种利用激光拉曼光谱对疏枝刺柳珊瑚进行定性鉴别的方法。

背景技术

拉曼光谱法是通过用激发光照射目标物，收集其内部分子对激发光的散射光谱进行分析，可以获得分子振动、转动方面信息，并应用于判断目标物内分子结构及含量的一种方法。光镊是利用高汇聚的激光束囚禁目标物，以达到在溶液中将其固定的效果。结合光镊技术的激光镊子拉曼光谱称为激光镊子拉曼光谱(LTRS)，其使目标物更接近其自然生理状况，降低了目标物运动时产生的不确定性，减少了杂光的干扰，提高了信噪比。近年来，拉曼光谱技术已被广泛应用于生物领域，如疾病判断，微生物鉴定，细胞成像等多个方面。

柳珊瑚(Gorgonian)属于腔肠动物门珊瑚虫纲八放珊瑚亚纲软珊瑚目，是硬轴珊瑚、全轴珊瑚和钙轴珊瑚等三种亚目的统称。柳珊瑚个体由中轴支撑，外形多以扇形、分枝形、鞭形等为主，全世界约有1200种。柳珊瑚的研究涉及到分类学、化学、生态学等多个方面。然而，柳珊瑚的拉曼光谱特征一直未见文献报道。本发明采用激光拉曼光谱方法对疏枝刺柳珊瑚进行定性检测，方法简便，分析速度快。目前，尚未发现柳珊瑚相关的激光拉曼研究报导。

发明内容

本发明目的在于提供一种操作简便，可迅速定性鉴定疏枝刺柳珊瑚的激光拉曼检测方法。本发明的技术方案如下：

(1)试样制备：疏枝刺柳珊瑚样品切成条块状颗粒后，装入样品瓶进行速冻，终点温度约-10-100℃。转移已速冻样品到真空冷冻干燥机的干燥室中，真空度为0.01-0.1MPa，干燥时间为12-48h。干燥好的疏枝刺柳珊瑚样品用玛瑙研钵碾磨成粉末后，再用100-400目滤网过滤，得到粉末状疏枝刺柳珊瑚样品。

(2)光谱条件：仪器激光功率10-100mW，扫描时间5-20s。将一束波长为500-1500nm激光经过滤波后导入一台倒置生物显微镜。激光束经油浸物镜(孔径为1.00-3.00，放大倍数为50-300倍)聚焦后在焦点附近形成了一个单光束光势阱。样品池由下底密封了20-200μm的石英盖玻片和上边密封了盖玻片的玻璃板构成，玻璃板中心有一个直径为1-10mm的孔。

(3)光谱测定：含有疏枝刺柳珊瑚样品微粒的缓冲液里放置在玻璃板中心孔中，被聚焦的激光束产生的辐射压力囚禁在焦点附近，同时这束激光也用来激发被囚禁疏枝刺柳珊瑚样品的拉曼散射。在测定疏枝刺柳珊瑚样品前用悬浮在水中的直径约1-10μm的聚苯乙烯球状颗粒进行校正。

(4)特征光谱：将实际扫描结果与理论计算结果对比，校对，指认激光拉曼图谱中各个光谱峰的振动原理，确定疏枝刺柳珊瑚的主要特征峰范围为1000-1050cm^-1、1100-1200cm^-1、1450-1550cm^-1。

本发明的优点：采用本发明激光拉曼光谱对疏枝刺柳珊瑚进行定性检测，操作简便，可快速准确定性分析，可用于大规模样品的快速检测。

附图说明

图1疏枝刺柳珊瑚的激光拉曼光谱。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施。

疏枝刺柳珊瑚样品0.10g切成条块状颗粒后，装入样品瓶进行速冻，终点温度约-80℃。转移已速冻样品到真空冷冻干燥机的干燥室中，真空度为0.08MPa，干燥时间为36h。干燥好的柳珊瑚样品用玛瑙研钵碾磨成粉末后，再用100目滤网过滤，得到疏枝刺柳珊瑚粉末状样品。

将一束波长为780nm激光经过滤波后导入一台尼康倒置生物显微镜(TE2000U，Nikon)。激光束经油浸物镜(孔径为1.30，放大倍数为100倍)聚焦后在焦点附近形成了一个单光束光势阱。样品池由下底密封了100μm的石英盖玻片和上边密封了1号盖玻片的玻璃板构成，玻璃板中心有一个直径为6mm的孔。含有疏枝刺柳珊瑚样品微粒的缓冲液里放置在玻璃板中心孔中，被聚焦的激光束产生的辐射压力囚禁在焦点附近，同时这束激光也用来激发被囚禁疏枝刺柳珊瑚样品的拉曼散射。在测定疏枝刺柳珊瑚样品前用悬浮在水中的直径约2μm的聚苯乙烯球状颗粒进行校正。

疏枝刺柳珊瑚样品的激光拉曼光谱在1006、1111、1501cm-1谱带峰突出。其中，1006cm^-1峰代表-CH₃水平摇摆振动模式，1111cm^-1峰代表C-C伸缩振动模式，1501cm^-1峰代表C＝C伸缩振动模式。

以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容，除此之外，本发明还有其他实施方式，但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示，而采用等同替换或等效变形方式形成的技术方案均落在本发明的保护范围内。