[发明专利]一种在磁珠表面共价偶联蛋白质的方法

权利要求书

1.一种在磁珠表面共价偶联蛋白质的方法，包括如下步骤：

（1）将磁珠与活化剂共孵育，得到活化后的磁珠；

（2）将所述活化后的磁珠与蛋白质共孵育，得到偶联有所述蛋白质的磁珠；

（3）将所述偶联有所述蛋白质的磁珠用封闭液进行处理，封闭表面的活性位点；

（4）将步骤（3）得到的磁珠边进行振荡边过筛，收集过筛后的磁珠。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述磁珠为羧基磁珠。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述活化后的磁珠表面具有含N-羟基丁二酰亚胺键的化学基团。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述活化剂为EDC和NHS，或所述活化剂为EDC和Sulfo-NHS。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述步骤（1）中，所述共孵育的反应体系为pH4.0-7.0、0.01-0.1M的MES缓冲液；

所述步骤（1）中，所述活化剂为EDC和NHS时，所述EDC的初始浓度为0.1-30mM，所述NHS的初始浓度为0.3-100mM；

所述步骤（1）中，所述活化剂为EDC和Sulfo-NHS时，所述EDC的初始浓度为0.1-30mM，所述Sulfo-NHS的初始浓度为0.3-100mM；

所述步骤（1）中，所述共孵育的时间为6-300分钟，优选为10-240分钟。

6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述共孵育的反应体系为pH4.0-7.0、0.01-0.1M的MES缓冲液；所述步骤（2）中，所述共孵育的条件为：2-26℃、2-20小时。

7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述封闭液为含0.2-5g/100mL封闭蛋白的缓冲液；所述缓冲液为MES缓冲液、PBS缓冲液或Tris缓冲液；所述步骤（3）中，所述“将所述偶联有所述蛋白质的磁珠用封闭液进行处理”的处理时间为1-9小时。

8.如权利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，所述过筛为过800目-1500目筛。

9.权利要求1至8中任一所述方法制备得到的磁珠产品。

10.权利要求9所述磁珠产品在鉴定和/或分离与所述蛋白质结合的物质中的应用。