[发明专利]促红细胞生成素模拟肽化学二聚体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、其制备方法、含有它的药物组合物，以及所述促红细胞生成素模拟肽化学二聚体在预防或治疗以缺乏促红细胞生成素或红细胞缺少或缺陷为特征的疾病中的用途。

背景技术

促红细胞生成素（EPO）是一种造血生长因子（Hematopoietic growth factor，HGF），是红细胞生成过程所必须的一种糖蛋白。含有165个氨基酸，分子量约为30.4kD，40%的分子量为糖基化修饰结果，糖基化位点分别是24,38,83位的天冬酰胺侧链氨基N-糖基化及126位丝氨酸侧链羟基O-糖基化。在人体中，EPO主要是在肾脏和胎儿的肝中产生的，由肾小管的管周毛细血管内皮细胞合成并释放。EPO作为一种细胞因子在骨髓造血组织中发挥促进红细胞生成的作用，从而提高血红蛋白的浓度，以保证足够的氧气从肺运输到需氧组织。正常情况下，EPO的生成与组织中氧气浓度成反比关系，组织缺氧时，EPO生成增多，以保证各组织器官得到足够的氧气供给。当血浆EPO浓度在10-25mU/mL范围内，即可维持血红蛋白的正常水平（12-17g/dL），半衰期约为5h。EPO除了能够在造血组织促进红细胞的生成，在非造血组织器官中也发挥着重要作用，如促进一些组织器官的生长发育，参与心血管形成、修复及心肌膜损伤修复过程，EPO还参与大脑对神经元损伤的应答过程及伤口愈合过程。

在红细胞生成过程中，首先由骨髓产生造血祖细胞，在多种细胞因子的作用下形成粒细胞（Granulocyte，G）-幼红细胞（Erythroid，E）-单核细胞（Monocyte，M）-巨核细胞（Megakaryocytic，M）的集落形成单位，再经过爆式红系集落形成单位（Erythroid burst-forming units，BFUe），进一步分化为红细胞系集落形成单位（CFUe）。EPO结合到CFUe表面的EPO受体（EPOR），形成幼红细胞，幼红细胞进一步分化为网状细胞，最后形成红细胞。这个过程不仅需要铁、叶酸、维生素B12等营养物质，还需要许多细胞因子的参与，而EPO是红细胞生成过程中最主要的调控因子。因此，缺乏EPO，就容易引发贫血症。多种继发性贫血症都是由于细胞因子EPO生成不足而引起的。研究表明，EPO可以用于治疗多种原因导致的贫血（戴肖岚，陈晓农，重组人类促红细胞生成素治疗贫血研究进展，浙江临床医学2004年9月第6卷第9期，827-828）。

20世纪80年代，对继发性贫血治疗方法的研究才逐渐引起重视，通过对其病理生理学的研究，研制了一些红细胞生成刺激因子（Erythropoietic-stimulating Agents，ESAs）类药物，主要是EPO受体激动剂。自此，EPO药物一直是药物研究的一个热点，EPO产品的销量持续处于销售量最好药物的第四位，并且EPO市场仍在持续增长。ESAs类药物在继发性贫血的治疗市场上已经占有了主导地位。

1996年，采用噬菌体展示技术用一些由随机肽序列组成的组合库对EPO受体进行扫描，得到了许多与内源性EPO没有序列相关性的短肽，这些短肽能结合EPO受体，引发一系列信号转导，促进相应细胞系的增殖，并且作用机制与EPO相同。但是这些短肽中半数有效浓度（EC₅₀）最小的为200nM，远高于同时测得的EPO的EC₅₀（20pM），另外，它们的体内稳定性也较差，因此，不能满足成药条件。然而，这些肽序列的发现却为后续研究起到了指导作用。

在中国专利201210170307.7中，其中式（1a）具有良好的促进红细胞、血红蛋白和网织红细胞增殖的作用。

由于EPO受体是通过配体诱导的EPO受体的二聚化而激活，1999年，Oded Livnah从晶体结构证实，配体（即本文中的促红细胞生成肽）的二聚化构象也是激动EPO受体产生生物学效应的关键所在(Science1999，283：987-990)。因此，为了进一步提高序列（1a）的活性，本发明在中国专利201210170307.7的基础上，通过化学手段，获得基于序列（1a）的化学二聚体，提供了一种生物活性更高的促红细胞生成素模拟肽及其可药用盐。

发明内容

本发明人令人惊奇地发现，对单链促红细胞生成模拟肽进行化学二聚化后，得到的促红细胞生成素模拟肽具有活性更高的EPO受体激动活性。本发明基于上述发现而得以完成。

发明概述