[发明专利]分析烟草及烟草制品中有机氯、菊酯类和二硝基苯胺类农药残留的GC-MS/MS方法

说明书

技术领域

本发明属于烟草及烟草制品中农药残留检测技术领域，主要涉及烟草及烟草制品中的有机氯类、拟除虫菊酯类和二硝基苯胺类农药残留的测定技术。

背景技术

有机农药按化学结构性质分主要包括有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类、有机氮（包括酰胺类和硝基类）等。

农药残留是指农药施用于农作物之后，残留在环境、农作物和生物体内的微量农药及其代谢物和降解产物等。在烟草的育苗生长和采摘后的储存过程中，不可避免的使用到除草剂、植物生长调节剂、杀虫剂、杀螨剂和杀菌剂等。而同时烟草作为一种吸食品，其安全性要求高，因此，烟草中的农药残留得到了广泛的关注。

鉴于农药残留的危害性和重要性，很多国家和地区提出了对多种农作物中的农药残留限量及质控方法，如日本的一齐法、欧盟的SANCO/10684/2009等。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）于2003年12月提出了烟草中99种农药的指导性残留限量（GRLs， Guidance Residue Levels）,2008年6月进行了修订，现为118种。

多种农药残留分析的方法（Multi Residue Methods）可对不同种类、不同极性和不同化学性质的多种农药一次进样完全分析，缩短分析时间，提高检测效率。在多种农药残留分析中，使用最多的方法即色质联用，包括用GC或LC进行分离，用MS进行定性定量检测。对烟草中有机氯、拟除虫菊酯类和二硝基苯胺类等多种农药残留分析的检测方法主要是气相色谱法（GC）和气相色谱-质谱联用（GC-MS）。气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）是一种高效的多农残分析手段，质谱作为检测器提高了方法在定性上的可靠性，二级质谱（MS/MS）相对一级质谱（MS），其抗干扰能力更强，对样品前处理的要求更低。

为适应二级质谱的高选择性和强抗干扰能力，前处理方法中应用最多的就是简单快速的QuEChERS方法。自2003年起，Anastassiades等提出了适用于水果和蔬菜中多残留分析的QuEChERS方法之后，该方法迅速发展并不断改进，并应用到烟草及烟草制品中农药残留的测定。该方法的一般原理是，乙腈萃取后用PSA净化，而后或稀释或溶剂替换，上机检测。

发明内容：

本发明的目的旨在进一步简化现有方法并得到更干净的上机溶液，提供一种样品经水浸润后，加入乙腈和内标物，然后涡旋提取、盐析分层，然后用氯化钠水溶液与正己烷进行二次盐析和液液萃取，取正己烷上清液，以气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）进行测定的方法。该方法能快速、准确检测烟草及烟草制品中的有机氯、拟除虫菊酯类和二硝基苯胺类等农药残留，测定结果准确、重复性好。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：本发明的分析烟草及烟草制品中的有机氯、拟除虫菊酯类和二硝基苯胺类农药（共包括表1中43种）残留的GC-MS/MS方法，包括以下步骤：

a、内标溶液的配制：配制TPP（三苯基磷酸酯）浓度为20 μg/mL的丙酮溶液；

b、称取样品：称取2.0 g烟草样品于50 mL具塞离心管中，精确到0.1 g； 

c、加水浸润样品：准确加入10 mL水，浸润10 min；

d、振荡萃取：准确加入10 mL乙腈和100 μL内标溶液，在漩涡混合振荡仪上以2000 rpm涡旋1 min；

e、盐析分层：加入盐析试剂包（含4 g无水硫酸镁，1 g氯化钠，1 g柠檬酸钠和0.5 g柠檬酸氢二钠），立即于漩涡混合振荡仪上以2000 rpm振荡2 min，在高速离心机上以5000 rpm离心3 min；

f、液液萃取：取1 mL乙腈提取液于15 mL离心管中，并加入1 mL正己烷和5 mL 20%氯化钠水溶液，在漩涡混合振荡器上以2000 rpm的转速振荡2 min，在高速离心机上以5000 rpm离心3 min，取上层正己烷溶液待用；

g、准备标准工作溶液：分别称取0.010 g（精确至0.1 mg）各种农药标准品，置于同一10 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容，然后用正己烷-丙酮（9：1，v/v）稀释并最终配制成具有浓度梯度的各种农药的标准工作溶液； 

h、准备基质配标工作溶液：对空白烟草样品按相同的前处理方式处理后，分别取1 mL上层正己烷溶液氮气吹干后，用1 mL不同浓度梯度的农药标准工作溶液进行复溶；