[发明专利]一种检测2型猪圆环病毒IgM抗体的ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物技术领域，具体涉及一种检测2型猪圆环病毒IgM抗体的ELISA试剂盒，可用于2型猪圆环病毒的IgM抗体检测及早期感染的诊断。背景技术

临床上，猪群中2型圆环病毒（PCV2）感染非常普遍，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的检测方法，现有的方法主要只针对IgG抗体检测，不能区分母源抗体和PCV2感染以及疫苗免疫之后的抗体，不能有效地对该病进行诊断及帮助制定合理的防控措施。

目前国内已有报道的检测PCV2-IgM的方法是间接ELISA方法，但是该方法的敏感性和特异性都不够理想，也没能够用于临床；国外检测PCV2-IgM抗体的方法主要是西班牙INGENASA公司生产的捕获法抗体检测试剂盒，但是该试剂盒需要制备针对PCV2的单克隆抗体，生产成本较高，且检测原理较为复杂、检测时间过长，这些都不利于临床推广使用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种检测PCV2-IgM抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒具有特异性好、敏感性高，且操作过程简单、所需检测时间少等优点，可用于PCV2的IgM抗体检测及早期感染的诊断。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种检测PCV2-IgM抗体的ELISA试剂盒，其特点是，所述试剂盒包括已包被抗猪IgM抗体的ELISA板条、及抗2型猪圆环病毒抗体的酶标记抗原。

上述试剂盒还包括洗涤液、血清和酶标抗原稀释液、底物显色液、终止液、阴性对照及阳性对照。其中：

所述ELISA板条：每个试剂盒包含5块ELISA板，每块板含可拆卸的该ELISA板条，规格为8孔×12条；

所述洗涤液：10倍浓缩的pH为7.4的含0.5%体积百分比的吐温-20的1M磷酸盐溶液（PBS）200ml；

所述抗2型猪圆环病毒抗体的酶标记抗原：100倍浓缩的辣根过氧化物酶标记的2型圆环病毒的Cap蛋白重组抗原0.5ml；

所述血清和酶标抗原稀释液：pH为7.4的1M PBS溶液100ml；

所述底物显色液：TMB显色液50ml；

所述终止液：2M硫酸溶液50ml；

所述阴性、阳性对照：标准PCV2阴、阳性血清各0.2ml。

本发明的试剂盒基于的原理不同于间接法和抗体捕获法。其基本原理是：首先用抗猪IgM的抗体包被ELISA板，用于捕获检测样品中总的IgM抗体，然后加入能够与PCV2特异性抗体结合的辣根过氧化酶（HRP）标记的酶标抗原，最后进行显示和终止反应。如果样品中含有特异性的PCV2-IgM抗体，则首先被捕获抗体捕获，然后被HRP标记的抗原结合，呈阳性反应；反之，则呈阴性反应。

对于PCV2，IgM抗体理论上则只会在感染或者免疫之后出现，因此对IgM的检测可以区分母源抗体和感染之后产生的抗体，对IgG和IgM的联合检测可以更加准确的确定感染的时机以及感染率的高低、分析疫苗免疫后产生的抗体指标从而评价疫苗的效果。

应用本试剂盒对猪繁殖与呼吸综合症病毒标准阳性血清、猪瘟病毒标准阳性血清、伪狂犬病毒标准阳性血清、口蹄疫病毒标准阳性血清、猪细小病毒标准阳性血清、大肠杆菌标准阳性血清进行检测，结果均为阴性。说明本试剂盒所用诊断抗原与其它病原抗体之间无交叉反应。

本发明的试剂盒与西班牙INGENASA公司试剂盒比较：INGENASA公司检测PCV2-IgM抗体的ELISA试剂盒在欧美等养猪业发达国家被广泛应用，是目前国际上公认的一种检测PCV2抗体的优质诊断试剂盒。分别用本试剂盒与INGENASA公司检测PCV2-IgM抗体的ELISA试剂盒检测146份临床送检血清，结果表明两种方法的检测结果具有很好的一致性，结果见下表1。

表1本发明试剂盒与INGENASA公司试剂盒比较试验

注：Kappa系数＞0.75表示两种方法有很好的检测一致性，值越大说明一致性越好。

并且，与INGENASA公司检测PCV2-IgM抗体的试剂盒相比，本试剂盒省去了酶标抗体孵育过程和6次的洗涤过程，从而节省了将近1个小时的检测时间。

本发明的试剂盒具有特异性好、敏感性高的特点，且操作过程简单、所需检测时间少，可用于2型猪圆环病毒的IgM抗体检测及早期感染的诊断。

具体实施方式

抗体捕获酶标板（ELISA板）的制备：