[发明专利]辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的引物组及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的引物组及其应用。

背景技术

猪流感一种急性、传染性呼吸道疾病，影响猪的发育，延缓猪的生长及出栏时间，给养殖业带来重大经济损失。猪流感病毒主要包括H1与H3两种亚型。其中欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒是H1亚型猪流感病毒的一大优势谱系。2006年以后，欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒成为猪流感病毒的优势流行毒株。

传统的流感病毒检测方法为采用鸡胚进行病毒的分离培养（需时2-3天），然后采用血凝抑制试验进行流感病毒亚型及分支的鉴定（需时1天）。这种传统的检测方法费时、费力，不能做出快速而及时的诊断。由于流感病毒抗原特性的变异，常常导致常规血清学方法无法检出流行毒株，出现漏检的情况。此外，用于猪流感检测的鼻腔拭子样品通常病毒含量较低，由于普通RT-PCR方法的灵敏度限制，易出现假阴性结果。临床上，迫切需要一种能快速有效的检测欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的方法，有助于实现对该疾病的实时监测，对于疫情的防控意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的引物组及其应用。

本发明提供的引物组，包括引物对乙；所述引物对乙由序列表的序列3所示单链DNA分子和序列表的序列4所示单链DNA分子组成。所述引物组还可可包括引物对甲；所述引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成。所述引物组可由所述引物对乙和所述引物对甲组成。

本发明还保护所述引物组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒。所述待测样本可为猪的肝、脑、肺等组织，也可为猪的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为猪的内脏组织（肝、脑、肺等）或猪的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。

本发明还保护一种试剂盒，包括所述引物组；所述试剂盒的用途为如下（a）或（b）：（a）辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒；（b）辅助鉴定待测样本中是否含有欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒。所述待测样本可为猪的肝、脑、肺等组织，也可为猪的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为猪的内脏组织（肝、脑、肺等）或猪的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。

本发明还保护所述引物组在辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒中的应用。所述应用中不包括疾病治疗和诊断方法。

本发明还保护第一种辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用所述引物对乙进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测病毒为候选的欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测病毒为候选的非欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒。所述PCR扩增产物的大小可为400-500bp,具体可为462bp。所述待测病毒可为欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒、H9N2亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、H1N2亚型猪流感病毒和经典H1N1亚型猪流感病毒。所述方法为非疾病治疗和诊断方法。

本发明还保护第二种辅助鉴定欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的方法，依次包括如下步骤：（1）以待测病毒的cDNA为模板，用所述引物对甲进行PCR扩增；（2）将完成步骤（1）的体系作为模板，用所述引物对乙进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测病毒为候选的欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测病毒为候选的非欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒。所述PCR扩增产物的大小可为400-500bp,具体可为462bp。所述待测病毒可为欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒、H9N2亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、H1N2亚型猪流感病毒和经典H1N1亚型猪流感病毒。所述方法为非疾病治疗和诊断方法。

本发明还保护所述引物组在辅助鉴定待测样本中是否含有欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒中的应用。所述待测样本可为死亡的猪的肝、脑、肺等组织，也可为死亡的猪的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为猪的内脏组织（肝、脑、肺等）或猪的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。所述应用中不包括疾病治疗和诊断方法。