[发明专利]用于牛鞭草品种鉴定的EST-SSR分子标记引物组及牛鞭草品种鉴定方法

说明书

技术领域

发明涉及植物遗传育种技术领域，尤其涉及用于牛鞭草品种鉴定的EST-SSR分子标记引物组及牛鞭草品种鉴定方法。

背景技术

牛鞭草属(Hemarthria R.Br.)植物是禾本科黍亚科多年生草本，分布较广，种类较多，全世界有近20个种，其中扁穗牛鞭草(H.compressa)和牛鞭草(H.altissima)产量高、品种好、适应能力强，是亚热带重要的多年生禾本科牧草之一。目前世界范围内牛鞭草属共登记的7个品种也属此两个种，为我国育成登记的3个扁穗牛鞭草栽培品种“广益”、“重高”和“雅安”以及美国登记的4牛鞭草品种Redalta、Greenalta、Bigalta和Floralta。其中，“广益”、“重高”、“雅安”、“Redalta”、“Greenalta”和“Bigalta”为目前我国最常见的牛鞭草品种。牛鞭草属因其具有生长速度快、再生力强、产量高、适应性和抗逆性较强、水土保持能力优良等优点，已在热带、亚热带地区得到广泛利用，为当地畜牧业发展和生态环境建设作出了突出贡献，在草地农业系统中占有重要地位。

优良品种是牧草高产的重要基础，牧草种子（苗）质量是牧草品种特性的重要组成部分，牧草品种的真假和种子（苗）质量的优劣直接关系到草业的健康发展。为防止假劣种苗冒充牛鞭草属品种坑农害农，阻碍牛鞭草属优良品种推广和利用，侵害育种家利益的现象发生。因此，采用日臻完善的分子标记技术，构建牛鞭草属品种DNA指纹图谱，从而鉴定牛鞭草属种质资源的真实性和保护牛鞭草属品种的知识产权已成为当务之急。

分子标记技术由于具有快速简便，可以实现高通量等优点，已被广泛应用于种质资源遗传多样性分析、品种指纹图谱及纯度鉴定、作物遗传连锁图谱构建等方面。利用分子标记技术建立DNA指纹图谱则是鉴别品种、品系和选择杂交亲本的有力工具。目前用于构建植物DNA指纹图谱的标记技术主要有RFLP(restriction fragment length polymorphism，限制性片段长度多态性)、SSR(simple sequence repeat，简单重复序列)、AFLP(amplified fragment length polymorphism，扩增片段长度多态性)、RAPD(randomly amplified polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)、SCoT（Start codon targeted polymorphism，目标起始密码子多态性）及小卫星等。EST-SSR（expressed sequence tags SSR）是存在于表达序列标签（expressed sequence tags）中的简单重复序列是两种新型的分子标记技术，比以往分子标记具有更多优点。EST-SSR具有SSR多态信息含量高、重复性好等特点，相比SSR，其开发不需要构建DNA文库及克隆测序等步骤，更为节省成本和时间，

牛鞭草属靠根茎繁殖，品种内遗传稳定性好，其构建的指纹图谱比异花授粉植物构建的指纹图谱重复性更好，能更好的起到参照作用。但是，由于很难寻找到适合大部分牛鞭草的EST-SSR分子标记引物，而若筛选出的引物不能鉴定出大部分的牛鞭草品种，则该引物也不具有使用价值。因此，目前尚没有关于牛鞭草属品种EST-SSR分子标记引物方面的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供牛鞭草品种鉴定的EST-SSR分子标记引物组及牛鞭草品种鉴定方法，采用本发明提供的牛鞭草品种鉴定的EST-SSR分子标记引物及牛鞭草品种鉴定方法，可对我国最常见的6个牛鞭草品种进行准确鉴定。

本发明提供了一种用于牛鞭草品种鉴定的EST-SSR分子标记引物组，由具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的下游引物组成。

作为优选，本发明提供的EST-SSR分子标记引物组可鉴定的牛鞭草品种为：广益、重高、雅安、Redalta、Greenalta和Bigalta。

采用本发明提供的EST-SSR分子标记引物组对牛鞭草6个品种进行鉴定，结果表明，无任何两品种之间的遗传相似度达到100%，即：每份资源都有唯一的指纹图谱。采用本发明提供的EST-SSR分子标记引物组可把牛鞭草属6个品种材料全部区分开。

本发明还提供了一种牛鞭草品种的鉴定方法，包括以下步骤：

步骤1：采用具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的下游引物对待鉴定牛鞭草的基因组DNA进行扩增，获得扩增产物；