[发明专利]一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于植物鉴定技术领域，涉及一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法。

背景技术

人工种植甘草，包括乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草。其中以乌拉尔甘草最受欢迎，因为在中国药典允许入药的三种甘草中以乌拉尔甘草质量最好，甘草酸含量最高（甘草质量评价方法研究进展，陈云华 王文全 时珍国医国药，2008,19（6）：1054-1055页）。按照中国医药保健品进出口商会《关于印发2010年下半年甘草及甘草制品出口行业价格的通知》（医商招字【2010】第2号）相关要求，自2010年7月1日起调整甘草及甘草制品出口行业价格，乌拉尔甘草条草 2.8美元/kg，胀果甘草条草为1.7美元/kg，还不到乌拉尔甘草价格的61%（来源：食品商务网，时间：2010-05-19  10：54:00）。由此可以看出为什么人们种植甘草均愿选用乌拉尔甘草原因。

    在种植甘草的过程中，常常因不能区分乌拉尔甘草种子与胀果甘草种子而产生纠纷和损失，如，2010年甘肃省兰州市榆中县三角城乡丁家庄村的3户村民从县中草药产销协会购买了红皮甘草籽种（乌拉尔甘草）为该协会育苗，可到2011年采挖甘草苗时，他们却发现红皮甘草籽种出的甘草苗竟是黄皮的（胀果甘草）。该协会以颜色不对路、长相难看为由不予回收。无奈，种植户只好投诉到工商部门。经工商执法人员和县中草药产销协会负责人最终认定是当初销售的甘草种子存在问题。经工商部门调解最后县中草药产销协会赔偿3户种植户9845元的籽种钱（行业动态—红皮甘草怎么出了黄皮苗）。可见乌拉尔甘草与胀果甘草的差异和市场对乌拉尔甘草的渴求。

但人们如何区别乌拉尔甘草和胀果甘草种子十分困难，因为二者的种子和幼苗极为相似，只有种上生长两三年后才能从两年生以上的叶、果实、果穗及根等才能区分开来，但这时区分已经意义不大，因为已经造成了无法弥补的损失。况且我国现在的甘草种子均由野生甘草种群采集而来，因为甘草种子供不应求，价格不断攀升，种子掺假现象时有发生【我国的甘草资源与甘草栽培技术，王文全 吴庆丰 中药研究与信息，2001,3（12）:18-20页】，因此，准确鉴定人们需要的甘草种子非常必要。2012年甘肃农业大学的张佳杰，蔺海明，刘婷等对乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草3种入药甘草的种子特征及鉴别指标进行了研究，得出结论称：3种甘草中‘乌拉尔甘草’与‘光果甘草’较易区分，从种子颜色、形状、大小均一程度上即可区分，但‘乌拉尔甘草’与‘胀果甘草’种子不易区分，除了观察种子颜色、形状、大小程度以外，还需比较种子硬实程度、种脐特点、千粒质量以及种子断面颜色，方可区分（ 3种入药甘草的种子特征及鉴别指标研究，张佳杰，蔺海明，刘婷  甘肃农业大学学报 2012,47(4): 68～72页）；可见乌拉尔甘草种子与胀果甘草种子是多么难以区别；而且现实中我们很难同时拿到两种甘草种子去区别它们，而是只有一种甘草种子要我们判断它是不是乌拉尔甘草种子，这其中不是乌拉尔甘草种子最大可能就是胀果甘草种子，因为现在内蒙、甘肃、宁夏等地的野生乌拉尔甘草已经很少很少，我们国家的甘草主要靠新疆来提供，新疆甘草占全国甘草份额的65%以上，而新疆甘草中按根茎储量分：胀果甘草占83%，乌拉尔甘草占14%，光果甘草占3% （甘草应用汇报材料—豆丁网），所以，鉴定乌拉尔甘草种子，主要是与胀果甘草种子相区别。我们在研究乌拉尔甘草与胀果甘草种子的生理生化差异时发现，二者在超氧化物歧化酶（SOD）同工酶酶谱上存在显著的稳定差异，可作为区别乌拉尔甘草与胀果甘草种子的指标。

发明内容

本发明公开了一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法，其特征在于按如下的步骤进行：  

 一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法，其特征在于按如下的步骤进行：  

  （1）酶液的制备：取待鉴定的甘草种子，在自来水中浸泡6-8小时，在室温下置于器皿中，保持湿润令其发芽，待胚根长到1-1.5cm时，按照1g样品加入1ml电极缓冲液研磨，在0-4℃下，以10000转/分钟，离心10分钟，上清液即为SOD提取液；所述的电极缓冲液指的是pH 8.3的电极缓冲液。

（2）制凝胶板：将玻璃板洗净放好封胶条，装入电泳槽，插入楔板；然后灌胶：先灌分离胶，用水封住，待出现界限后，吸干水封，再灌入浓缩胶，插入梳子，待浓缩胶凝固后，拔去梳子，去掉封胶条，重新装好电泳槽；

其中分离胶与浓缩胶的配制如下：