[发明专利]用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子检测领域，具体涉及一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物及方法。

背景技术

种子质量是农业生产中的重要元素，其质量的优劣程度直接影响农产品的质量和产量。传统的品种的纯度和真伪鉴定是以形态学标记为依据，这种鉴定方法从农业生产角度具有稳定可靠的优点，但从遗传学角度看，品种的纯度和真伪鉴定是实质上是对品质基因型的鉴定，只有通过鉴定DNA分子本身才能准确可靠的鉴定品种的基因型。DNA 分子标记技术是随着分子生物学的发展而发展起来的一种新型的鉴定方法。它具有简便、快速、准确的特点。目前常用的分子标记技术包括AFLP，SRAP，SCAR，SSR等，SSR分子标记分布广泛，且具有共显性和高多态性等特征。

黄瓜是世界上重要的蔬菜作物。有限的亲本资源以及杂交品种的不断涌现，使得品种间尤其是杂交种子之间的遗传差异越来越小，蔬菜种子的真实性与品种纯度鉴定也越来越难，加之黄瓜为自花授粉作物，人工去雄不及时，常会出现假杂种，导致种子遗传纯度下降，给生产造成巨大损失。

 ‘粤秀3号’黄瓜是以A-2为母本，C-8为父本育成的华北型黄瓜一代杂种。具有生长势强，产量高，抗病抗逆型强的特点。是华南地区推广面积较多的品种。为了保证优良品种产生最大的经济效益，因此一种快速、准确、有效的品种鉴定方法非常重要。

发明内容

本发明的一个在于提供一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物。

本发明的另一个目的在于提供提供一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的试剂盒。

本发明的另一个目的在于提供提供一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的方法。

本发明所采取的技术方案是：

    用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物，为下述引物组1或引物组2，其中，引物组1的序列为：

3B-10-F：5’-CATCACGACCCTCTCCATCT-3’（SEQ ID NO:1）；

3B-10-R：5’-GGGTTTGATAGTGGAGATTATTCA-3’（SEQ ID NO:2）；

引物组2的序列为：

2B-41-F：5’-CACCGAGAACGAAAGAAGGA-3’（SEQ ID NO:3）；

2B-41-R：5’- TCTAAGGTGGGAGGGAAACC-3’（SEQ ID NO:4）。

   用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的试剂盒，其包括上述的引物组1或/和引物组2。

一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的方法，包括如下步骤：

（1）提取待检黄瓜种子或幼苗基因组DNA；

（2）以黄瓜基因组DNA为模板，使用权利要求1引物组1或引物组2进行PCR扩增；

（3）对扩增的产物进行凝胶电泳；

（4）对电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一条带记为假杂种，其中，引物组1产生128bp的母本特异标记，产生158bp的父本特异标记，引物组2产生177bp的母本特异标记，189bp的父本特异标记。

PCR扩增的20μl反应体系为：基因组DNA 5ng，Mg²⁺0.15mmol·L^-1，dNTP 0.2mmol·L^-1，SSR引物0.25 mmol·L^-1，Taq 酶0.2U，10×PCR buffer:2.0μl，ddH₂0补足至20μl。

PCR扩增的程序为：94℃预变性5min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环后，72℃保持7min，然后置于4℃保存待检测。

所述凝胶电泳为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

本发明的方法可将‘粤秀3号’杂交种子与其母本、父本种子区分开来，快速检测出杂交种子的纯度。本方法具有快速、准确、低成本，操作简单等优点，能够替代传统杂交种子纯度鉴定的方法，具有较高的商业应用价值。

附图说明

图1为引物组1对黄瓜‘粤秀3号’种子纯度鉴定的PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱（P1：母本A-2；P2：父本C-8：F1：粤秀3号种子）；

图2为引物组2对黄瓜‘粤秀3号’种子纯度鉴定的PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱（P1：母本A-2；P2：父本C-8：F1：粤秀3号种子）；