[发明专利]一种乳酸片球菌活菌制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵工程领域，具体地说是一种液体培养基经乳酸片球菌厌氧发酵制备益生菌饲料添加剂的方法。 

背景技术

乳酸片球菌（Pediococcusacidilactici）革兰氏阳性菌，不运动，兼性厌氧。细胞圆球状，在直角两个平面交替分裂形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性，不产细胞色素。 

乳酸片球菌的生理特性有如下几点：     产酸，调节胃肠道菌群，维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有拮抗作用，可竞争性地抑制病原微生物，增强动物机体的免疫功能，产生有益的代谢产物，激活酸性蛋白酶的活性，参与机体的新陈代谢，防止有害物质产生。 

乳酸片球菌是一种新型饲料添加剂，其用途和分类与我国的微生态制剂相同，属于益生素的一种，但比益生素又多具备保健剂之功能，尤其对人及动物无毒无病原性，对酸有很强的抵抗力，可顺利地通过胃，并在肠道内迅速增殖，调解肠道菌群，分泌类杀菌因子，刺激免疫系统提高免疫能力，促进动物全群健康水平等方面，是饲料业中的绿色添加剂。 

将乳酸片球菌经过高密度液体发酵，获得高菌体密度的发酵培养液，经植物淀粉吸附后，干燥，粉碎，制成的乳酸片球菌微生态制剂应用于畜牧养殖，能够调节动物肠道菌群平衡，增强机体免疫力，提高抗病能力。 

以往的乳酸片球菌的发酵方式主要存在以下问题和不足：（1）采用厌氧培养罐或通过持续通入二氧化碳或氮气维持其厌氧环境来进行，原料不能重复使用，操作较复杂，成本较高；（2）液体发酵产物的后处理需要高速冷冻离心机进行离心和低温冷冻干燥，工艺复杂，成本高昂，产量低；（3）发酵产物的活菌密度不够高。 

发明内容

本发明的目的是提供一种乳酸片球菌活菌制剂的制备方法，以克服现有的乳酸片球菌活菌制剂的制备方法上存在的上述不足。 

实现本发明目的的技术方案如下： 

一种乳酸片球菌活菌制剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）配制培养基；

（2）溶解上罐的培养基，装上pH电极并调整pH值，然后将培养基装入发酵罐中；

（3）对发酵罐中的培养基加温灭菌；

（4）接种乳酸片球菌种子菌：在发酵罐降温后加入无机盐溶液，然后加入液体石蜡及接入种子菌；

（5）控温发酵；控制pH值和温度，在保温的状态下发酵；

（6）放罐并测定发酵液菌数；

（7）用玉米粉、小麦粉或者大豆粉及其组合物吸附发酵液，将吸附后的混合物干燥和粉碎，制得稳定的乳酸片球菌活菌制剂。

与现有技术相比，本发明的技术优势：

（1）直接利用普通发酵罐即可进行生产，操作简单，质量稳定，成本低廉，易于产业化生产；

（2）产品成本与发酵污染风险降低：本发明由于生产周期缩短，生产成本降低，同时，发酵基料前期产酸较快、pH值下降迅速，能较好抑制杂菌污染，产品发酵失败风险大大降低；

（3）采用厌氧培养罐或通过持续通入二氧化碳或氮气维持其厌氧环境来进行，原料不能重复使用，操作较复杂，成本较高；用于隔绝空气的液体石蜡可以多次反复使用，大大降低了生产成本；

（4）本发明采用经过优化的乳酸片球菌液体发酵培养基，乳酸片球菌菌数含量明显提高，发酵产物活菌浓度可达1.0×10⁹ CFU/mL以上；

（5）本发明采用植物淀粉吸附发酵液，后处理工艺不需要用高速冷冻离心机，本发明将植物淀粉吸附混合物直接干燥和粉碎，包装后即制成产品，后处理工艺大大简化，生产成本更低；

（6）国内外有关粉末发酵剂的研制，大多采用真空冷冻干燥法，此方法的优点是菌体细胞存活率高，但是工艺复杂，制作成本高，而吸附后干燥法的生产成本低，操作工艺简单，较易用于大规模的工业化生产和推广应用，适合于我国饲料企业在现有设备条件下生产乳酸片球菌微生态制剂产品。

  

具体实施方式

    实施例1  制备乳酸片球菌活菌制剂的工艺流程，包括以下步骤：

   （1）菌种活化：