[发明专利]结晶型抗-hTNFα抗体

权利要求书

1.一种用于将抗-hTNFα抗体结晶的分批结晶方法，其包含以下步骤：

(a)提供所述抗体与作为结晶剂的无机磷酸盐混合的水溶液；和

(b)培育所述含水结晶混合物直至形成所述抗体的晶体。

2.如前述权利要求之一的结晶方法，其中所述含水结晶混合物的pH在约pH3-5的范围内。

3.如前述权利要求之一的结晶方法，其中所述含水结晶混合物包含缓冲剂。

4.如权利要求3的结晶方法，其中所述缓冲剂包含乙酸盐缓冲剂。

5.如权利要求4的结晶方法，其中所述缓冲剂包含乙酸钠。

6.如权利要求3-5之一的结晶方法，其中所述含水结晶混合物中的缓冲剂浓度为0M-0.5M。

7.如前述权利要求之一的结晶方法，其中所述磷酸盐为磷酸氢盐。

8.如权利要求7的结晶方法，其中所述磷酸盐为碱金属盐或至少两种不同碱金属盐的混合物。

9.如前述权利要求之一的结晶方法，其中所述结晶混合物中的磷酸盐盐浓度在约1-6M的范围内。

10.如权利要求9的结晶方法，其中所述结晶混合物中的盐浓度在约1.0-3.0M的范围内。

11.如前述权利要求之一的结晶方法，其中满足下述另外的结晶条件中的至少一个：

a）进行培育约1小时至约60天；

b）在约4℃到约37℃之间的温度进行培育；

c）抗体浓度在约0.5-约100mg/ml的范围内。

12.如前述权利要求之一的结晶方法，其进一步包含干燥所述晶体的步骤。

13.如前述权利要求之一的结晶方法，其进一步包括用不同缓冲液交换结晶母液的步骤。

14.如前述权利要求之一的结晶方法，其中每批体积在约1ml至20,000升的范围内。

15.包含IgG人抗-hTNFα抗体的晶体的组合物，其是通过如权利要求1的结晶方法获得的，其中所述晶体具有针状形态，其长度为约2-500μm，且l/d比率为约3至30。

16.如权利要求15的组合物，其中所述抗体是非糖基化抗体。

17.如权利要求15的组合物，其中所述IgG抗体选自IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体和IgG4抗体。

18.如权利要17的组合物，其中所述IgG抗体为IgG1抗体。

19.如权利要求15的组合物，其中所述IgG抗体是分离的人类抗体，其以均通过表面等离子体共振测定的1×10^-8M或更低的Kd以及1×10^-3s^-1或更低的K_a速率常数与hTNFα解离，且在标准体外L929测定中以1×10^-7M或更低的IC₅₀中和hTNFα细胞毒性。

20.如权利要求15的组合物，其中所述IgG抗体是具有下列特征的分离的人类抗体：a)通过表面等离子体共振测定以1×10^-3s^-1或更低的k_off速率常数与人类TNFα解离；b)具有轻链CDR3域，其包含SEQIDNO：3或通过在位置1、4、5、7或8通过单个丙氨酸取代或通过在位置1、3、4、6、7、8和/或9通过1至5个保守氨基酸取代修饰的SEQIDNO：3的氨基酸序列；c)具有重链CDR3域，其包含SEQIDNO：4或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10或11通过单个丙氨酸取代或通过在位置2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12通过1至5个保守氨基酸取代修饰的SEQIDNO：4的氨基酸序列。

21.如权利要求15的组合物，其中所述IgG抗体是分离的人类抗体，所述分离的人类抗体具有包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和包含SEQIDNO：2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。

22.如权利要求15的组合物，其中所述抗体是阿达木单抗。