[发明专利]一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菠萝蛋白酶的提取方法，尤其涉及一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法。

背景技术

菠萝蛋白酶是一种蛋白质水解酶，从菠萝茎中提取的菠萝蛋白酶是一种纯天然植物蛋白酶，具有很强的分解纤维蛋白和血凝块的能力，同时，菠萝蛋白酶具有消炎、增进药物吸收、防治心血管疾病、抑制肿瘤细胞生长等作用，在医药行业运用广泛。

目前，菠萝蛋白酶的提取方法，主要有化学提取法和物理提取方法，如专利CN1908165A提供了一种菠萝蛋白酶物理提取新方法，其提取菠萝蛋白酶的工艺步骤为：原料-清洗-粉碎-预处理-榨汁-离心-冷冻-过滤-超滤-干燥-成品，整个工艺能耗巨大，生产工艺复杂繁琐，成本高，不利于规模化生产，其菠萝蛋白酶产品得率较低。专利CN100368537C提供了一种菠萝蛋白酶冷冻干燥粉的制备方法，菠萝原料经清洗榨汁后，滤液用氧化锌吸附，超滤浓缩液，冷冻干燥等步骤制得菠萝蛋白酶冷冻干燥粉，可作为医药原料使用，该工艺较为简单，易于操作，但其产物酶活性太低，工艺中使用的材料昂贵，不经济。专利CN101307309A提供了一种利用金属螯合亲和膜提纯菠萝蛋白酶的方法，活化的尼龙膜经改性后，螯合金属锌离子，吸附菠萝蛋白酶，而后洗脱即可。该法需对尼龙膜处理，整个工艺复杂且耗时长，成本高，终产品纯化倍数低。

发明内容

本发明针对现有技术中提取工艺复杂，成本高昂，且所生产的酶细菌含量、重金属含量不能达到医药级标准的不足，提供了一种提取菠萝蛋白酶的酶活力、细菌含量、重金属含量、外观等指标均能达到或超过医药级标准的可工业化的提取方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。

一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，它包括如下步骤：

步骤一菠萝预处理，菠萝洗净后预冷处理；

步骤二粗粉碎，将预冷处理后的菠萝粉碎；

步骤三酶解，向粗粉碎后的菠萝块中加入木质素酶，酶解菠萝果肉细胞壁；

步骤四榨汁，酶解后的菠萝果肉，经压榨处理，获得菠萝果浆；

步骤五过滤，菠萝果浆经过粗过滤和循环过滤，获得带细渣的菠萝汁；

步骤六添加辅料，向带细渣的菠萝汁中添加辅料；

步骤七精过滤，精细过滤添加辅料的带细渣的菠萝汁，获得菠萝清液；

步骤八添加稳定剂，向菠萝清液中添加稳定剂乙二胺四乙酸二钠和抗坏血酸；

步骤九吸附剂吸附,向前一步添加稳定剂的菠萝清液中添加纤维素吸附剂，搅拌后静置，离心获得菠萝蛋白酶沉淀；

步骤十洗脱,加入去离子水和抗坏血酸至菠萝蛋白酶沉淀中，混合均匀后过滤得到菠萝蛋白酶清液；

步骤十一超滤,低温超滤菠萝蛋白酶清液，获得菠萝蛋白酶浓缩液；

步骤十二冷冻干燥获得成品,菠萝蛋白酶浓缩液经冷冻干燥后获得菠萝蛋白酶干固体。

作为优选，步骤一中菠萝预冷处理的温度为0～5℃，预冷处理时间为20～30小时。经过预冷处理，能减少菠萝蛋白酶酶活损失，又有利于后续粉碎处理。

作为优选，步骤三中木质素酶的添加量为菠萝总质量的0.001%～0.01%。木质素酶的处理，能够有效水解菠萝细胞壁，有利于细胞破碎，充分释放菠萝蛋白酶。

作为优选，步骤五中菠萝果浆先通过袋式过滤机粗过滤，而后通过卧式过滤机循环过滤获得菠萝汁。由于采用多步过滤的处理方式，首先通过袋式过滤机处理，除去体积较大的菠萝茎渣，而后通过卧式过滤机循环过滤，获得滤液，能有效提高产率和生产效率，降低劳动强度，有利于工业化精细化生产。

作为优选，步骤六中滤液中加入质量百分比为0.05%～0.5%的苯甲酸钠。苯甲酸钠作为一种常用的食品防腐剂，它的加入能有效防止滤液中微生物的滋生，降低终产品细菌含量。

作为优选，步骤七中带细渣的菠萝汁采用压滤机过滤，去除滤液中的细渣，获得菠萝清液。

作为优选，步骤八中菠萝清液中加入质量百分比为0.01%～0.1%的乙二胺四乙酸二钠和质量百分比为0.01%～0.1%的抗坏血酸。螯合剂乙二胺四乙酸二钠的加入能有效防止酶失活，抗氧化剂抗坏血酸的加入，能有效防止菠萝蛋白酶被氧化，防止提取过程中酶活损失。