[发明专利]一种从赭色小莫勒菌中提取三萜类物质泽渥萜的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从赭色小莫勒菌中提取三萜类物质泽渥萜的方法。

背景技术

    赭色小莫勒菌（Moelleriella ochracea）隶属于子囊菌门、粪菌纲、肉座菌目、麦角菌科、莫勒菌属。莫勒菌，是粉虱的重要病原真菌，在生物防治方面取得了显著效果，其代谢产物也呈现较好的抗菌、杀疟原虫活性，并对昆虫和肿瘤细胞有较强的毒性。人们已从其代谢产物中分离、纯化出一些有活性的物质，如泽渥萜，其分子式C₃₀H₅₂O₂，分子量444，是三萜类五元碳环物质，具有抗结核杆菌的作用，IC₅₀=12.5μg/ml。可见，莫勒菌在医学上具有潜在的应用价值。若要大规模生产应用，首先要考虑目标物的提取方法、提取量优化。

发明内容

本发明的目的是公开一种从赭色小莫勒菌中提取三萜类物质泽渥萜的方法，以促进其在医学领域的开发和应用。

本发明采取的技术方案如下： 

一种从赭色小莫勒菌中提取三萜类物质泽渥萜的方法，包括以下步骤：

1) 赭色小莫勒菌活化后，取菌块接种到PDB培养基中，在100~160r/min、24~28℃条件下连续培养7~10天即初级培养，按8％~10％接种量再次转接到PDB培养基中，在24℃~28℃条件下静止培养35~40天即次级培养；

2) 菌液与菌丝体过滤分离，菌丝体在3℃～15℃、有机溶剂中浸泡48～100小时，过滤得浸泡液，旋蒸温度控制在35℃～40℃得浸膏，回收有机溶剂；

加水溶解浸膏，水：浸膏重量比＝50:1～100:1，将水溶物倒入分液漏斗中，加入1～2倍的乙酸乙酯进行摇瓶萃取，摇瓶转速150r/min～280r/min，摇20～60min静止150min,旋蒸乙酸乙酯部分浓缩得粗提物，回收乙酸乙酯；

3）1倍粗提物体积的乙酸乙酯溶解粗提物，上200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯体积比60:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比30:1～10:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得提取物A；

4）1倍粗提物体积的乙酸乙酯溶解提取物A，上200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯体积比30:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比15:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得浸膏，氯仿溶解，放在4℃冰箱里挥干，得晶体状物质即泽渥萜。

其中，所述步骤1)中PDB培养基为：4g马铃薯粉，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L。

所述步骤2)中有机溶剂可以选丙酮、乙醇、甲醇。

本发明的显著优点：

1）            原料取材简单；

2）            设备简单，容易操作，成本低；

3）            制得的化合物纯度高。

附图说明

图1 ：提取的泽渥萜在硅胶板上纯度验证图

图2 ：提取的泽渥萜¹H NMR谱

图3 ：提取的泽渥萜¹³C NMR谱

图4 ：泽渥萜的化学结构。

具体实施方式

以下是本发明的几个具体实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。

实施例1

1) 赭色小莫勒菌（邱君志等，赭色小莫勒菌在中国的发现. 菌物学报，2009.28(1): 148-150）活化后，取菌块接种到PDB培养基（4g马铃薯粉，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L）中，在150 r/min、25℃条件下连续培养8 d即初级培养，按9％接种量再次转接到PDB培养基中，在25℃条件下静止培养38 d即次级培养；

2) 菌液与菌丝体过滤分离，菌丝体在4℃、乙醇中浸泡70小时，过滤得浸泡液，旋蒸温度控制在38℃得浸膏，回收乙醇。加水溶解浸膏，水：浸膏重量比＝70:1，将水溶物倒入分液漏斗中，加入1.5倍的乙酸乙酯进行摇瓶萃取，摇瓶转速200 r/min，摇40 min静止150 min,旋蒸乙酸乙酯部分浓缩得粗提物，回收乙酸乙酯；

3）1倍粗提物体积的乙酸乙酯溶解粗提物，上200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯体积比60:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比25:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得提取物A；