[发明专利]H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法

权利要求书

1.一套检验H7N9禽流感病毒的引物，其特征在于：通过环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒的引物组，序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQID NO：3、SEQ ID NO：4和/或SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8，上述引物可以检测到至少10个拷贝的禽流感病毒。

2.权利要求1所述的引物在制备用于检验H7N9禽流感病毒的试剂盒中的应用。

3.一种用于检验H7N9禽流感病毒的试剂盒，包括：

(1)环介导等温扩增反应试剂，包括扩增体系中各成分的组成；

(2)按照比例混合的权利要求1所述的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和/或SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8。

(3)阳性标本对照、阴性标本对照；

(4)使用说明书。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中还包括SYBR Green I染料，加入到产物中可以在紫外灯和日光下观察反应管颜色变化。

5.利用权利要求1的引物或权利要求3的试剂盒进行环介导等温扩增检测H7N9禽流感病毒方法，包括：

(1)RNA的提取及cDNA的制备

取样本，将病毒灭活后，进行反转录反应，得到cDNA，-20℃备用；

(2)H7N9亚型禽流感病毒HA或NA基因区的检测

2μL cDNA样品、5μL Bst DNA聚合酶缓冲液(10×)、2μL Bst DNA聚合酶(8000U/L)、5μL dNTP(10mmol/L)、3μL Betaine(5mol/L)、6μL Mg SO4(25mmol/L)、对应于H A基因的引物如权利要求1所述的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8各4μL、SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6各0.5μL、6μL H2O，混匀；

(3)恒温水浴或热块扩增或任何保温材料60℃～65℃，30min～90min；

(4)扩增产物采用荧光染料法同步检测。

6.如权利要求5所述方法能够检测到至少10个拷贝的禽流感病毒。

7.如权利要求5所述方法在检测食品及原料、环境样本中H7N9禽流感病毒方面的用途。

8.如权利要求5所述方法可以在基层或小型实验基地进行，同时也可应用于现场检测、卫生评价等方面。