[发明专利]从鹿茸冻干粉中提取IGF-1的方法

权利要求书

1.一种从鹿茸冻干粉中提取IGF‐1的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)鹿茸冻干粉的制备：将在-20℃以下冷冻贮藏的鲜鹿茸，锯成小段，并用 切片机切成2-3mm厚的薄片，然后将鹿茸片平铺在表面皿中，在-45℃以下，6pa条 件下，进行冷冻干燥48h，经冷冻干燥后的鹿茸片用超低温球磨粉碎机粉碎成300 目的粉末，在-20℃下贮存待用；

(2)酸性缓冲液超声波提取：取步骤(1)制备的鹿茸冻干粉一定量称重，加 入3-5倍体积的酸性缓冲液提取，所述的酸性缓冲溶液是50mM的磷酸盐缓冲液用 Tris‐HCl调pH2-3，低温下超声提取20-40分钟，减压抽滤，滤液于4℃低温放置， 药渣重复上述步骤提取，共计提取3次，合并3次的提取液；

(3)浓缩：步骤(2)所得的提取液先以10-30kDa透析袋进行透析，加入聚乙 二醇，浓缩，在冰浴下继以10-30kDa的超滤膜在超滤杯中浓缩；

(4)分离提纯：反相柱层析法，将步骤(3)所得的浓缩液上反相柱，固定相 为C₁₈，洗脱程序为：先以水洗脱，继以含有1％～5％三氟乙酸的甲醇-水1：4洗脱， 再用含有1％～5％三氟乙酸的甲醇-水1：1洗脱，收集流出液，合并含有IGF‐1的部 分；或采用制备型高效液相色谱，色谱柱固定相为C₈、C₁₈或C₄，流动相洗脱程序为： 30分钟内由含有1％～5％三氟乙酸的50％乙腈升至含有1％～5％三氟乙酸的90％乙腈的梯 度洗脱，收集含有IGF‐1的流出液；

(5)冷冻干燥：将步骤(4)所得含有IGF‐1的流出液在‐20℃下预冷冻，在‐40 ℃至‐60℃下进行冷冻干燥。