[发明专利]一种ACE抑制肽及其制备方法

权利要求书

1.一种富含ACE抑制肽的酪蛋白水解物，其特征在于，含有两个具有ACE抑制活性的肽片段，两个所述ACE抑制活性的肽片段的氨基酸序列分别为：YS和YQKFPQYLQY。

2.一种ACE抑制肽，其氨基酸序列为：YS。

3.一种ACE抑制肽，其氨基酸序列为：YQKFPQYLQY。

4.一种权利要求1所述的富含ACE抑制肽的酪蛋白水解物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）在底物浓度为5-9%的酪蛋白水溶液中，按照酶与底物的比为1:100的比例加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的水解条件为：温度为37℃、pH值为2.0-3.0，水解3h后，用沸水浴加热10min结束反应，冷却至室温；

（2）调整步骤（1）所得水解液的pH值至7.7-8.5，再用胰蛋白酶继续水解，胰蛋白酶的水解条件为：温度为45-50℃，pH值为7.7-8.5，胰蛋白酶与底物的比为1:500；水解3h后，水解液以沸水浴煮沸10min灭酶，然后冷却至室温；调节体系的pH值为6.8-7.0；之后，离心，取上清液;

（3）将步骤（2）所得上清液进行超滤处理，截留分子量为6Ku，收集超滤透出物，进行真空干燥，获得水分小于5%的水解超滤物，得到富含ACE抑制肽的酪蛋白水解物，其中含有两个片段具有ACE抑制活性，氨基酸序列分别为YS和YQKFPQYLQY。

5.根据权利要求3所述的富含ACE抑制肽的酪蛋白水解物的制备方法，其特征在于，在胰蛋白酶水解后添加风味蛋白酶脱苦，风味蛋白酶的水解条件为：风味蛋白酶与底物的比为3200U/g，水解温度为45-50℃、pH值为6.8-7.0、水解时间为1.5-2小时。

6.一种权利要求2所述的ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）在底物浓度为5-9%的酪蛋白水溶液中，按照酶与底物的比为1:100的比例加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的水解条件为：温度为37℃、pH值为2.0-3.0，水解3h后，用沸水浴加热10min结束反应，冷却至45-50℃；

（2）调整步骤（1）所得水解液的pH值至7.7-8.5，再用胰蛋白酶继续水解，胰蛋白酶的水解条件为：温度为48℃，pH值为7.7-8.5，胰蛋白酶与底物的比为1:500；水解3h后，水解液以沸水浴煮沸10min灭酶，然后冷却至室温；调节体系的pH值回至7.0；之后，离心，取上清液;

（3）将步骤（2）所得上清液进行超滤处理，截留分子量为6Ku，收集超滤透出物;

（4）超滤透出物通过Sephadex G-15进行分离，获得三个组分，分别检测三个组分的ACE抑制活性；

（5）选择步骤（4）中ACE抑制活性高的组分用色谱质谱检测仪器进行氨基酸序列的质谱检测，获得氨基酸序列为YS的片段；采用固相合成技术进行合成，得到具有ACE抑制功能的活性肽。

7.一种权利要求3所述的ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）在底物浓度为5-9%的酪蛋白水溶液中，按照酶与底物的比为1:100的比例加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的水解条件为：温度为37℃、pH值为2.0-3.0，水解3h后，用沸水浴加热10min结束反应，冷却至45-50℃；

（2）调整步骤（1）所得水解液的pH值至7.7-8.5，再用胰蛋白酶继续水解，胰蛋白酶的水解条件为：温度为45-50℃，pH值为7.7-8.5，胰蛋白酶与底物的比为1:500；水解3h后，水解液以沸水浴煮沸10min灭酶，然后冷却至室温；调节体系的pH值回至7.0；之后，离心，取上清液;

（3）将步骤（2）所得上清液进行超滤处理，截留分子量为6Ku，收集超滤透出物;

（4）超滤透出物通过Sephadex G-15进行分离，获得三个组分，分别检测三个组分的ACE抑制活性；

（5）选择步骤（4）中ACE抑制活性高的组分用色谱质谱检测仪器进行氨基酸序列的质谱检测，获得氨基酸序列为YQKFPQYLQY的片段；采用固相合成技术进行合成，得到具有ACE抑制功能的活性肽。

8.一种富含ACE抑制肽的抗高血压的奶粉，其特征在于，奶粉基质中添加权利要求4所得的酪蛋白水解物，或奶粉基质中添加权利要求6所获得的氨基酸序列为YS的ACE抑制肽和/或权利要求7所得的氨基酸序列为YQKFPQYLQY的ACE抑制肽。