[发明专利]抗蓝舌病病毒血清8型VP2蛋白的单克隆抗体BTV8-VP2-3E11及其识别的B细胞表位多肽和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体，尤其涉及一株分泌抗BTV8-VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体；本发明还涉及一个B细胞表位多肽，尤其涉及由上述单克隆抗体所识别的BTV8-VP2蛋白B细胞表位多肽；本发明还涉及上述杂交瘤细胞株、单克隆抗体以及B细胞表位多肽在制备诊断、检测或预防BTV8药物中的应用，属于BTV8的防治领域。 

背景技术

蓝舌病(Bluetongue，BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属的蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的反刍动物虫媒传染病。BTV能感染大多数家养的和野生的反刍动物，因动物的易感性不同表现出不同的临床症状。不同流行地区易感动物的死亡率差别很大，一般都可达到30%，在某些地区甚至更高。由于BT对世界经济的影响，世界动物卫生组织(OIE)将BT列为法定通报性疾病，我国将其划定为一类动物疫病。BT所造成的相关经济损失一方面是直接降低动物的生产能力和增加动物的死亡率，另一方面，也是更重要的一方面，是由于控制动物的流动、控制牛精液出口以及实施这些控制措施所需的费用而间接造成的动物贸易损失。 

BT最早于1876年发现于南非的绵羊，1902年被命名为“抗疟疾绵羊卡他热”，1905年被正式命名为“蓝舌病”。20世纪初，由于高度易感的非本土绵羊品种的引进致使BT开始在非洲蔓延。BT被认为是一种地方流行性疾病，位于纬度40°S和53°N的美洲、非洲、亚洲、澳洲是高发地区，仅1996年造成全球范围内的经济损失高达30亿美元。1979年我国首次在云南绵羊发现蓝舌病，随后在29个省均检出BT阳性家畜，如山西（1991）、甘肃（1990）、四川（1988）、安徽（1985）、湖北（1983）等。BT主要通过媒介昆虫库蠓叮咬传播，病畜与健康家畜接触不传染，具有非接触传播的特点。2006年以来，随着气候变暖，BT尤其是BTV8在欧洲许多国家如比利时、荷兰、法国、德国等爆发，造成了严重的经济损失，同时也扩大了BTV的传统分布范围。覃绍敏等(2011)对广西11个地区的山羊BT进行了血清学调查，结果表明 阳性率为6.3%-45.1%，平均阳性率为20.5%。这表明BT对我国的反刍动物具有潜在的威胁性。 

BTV血清型众多，目前已发现24个血清型，而随着气候变化新的血清型不断出现，如最近又相继分离到的BTV25（瑞士，2008年）和BTV26（科威特，2011年）。然而由于各个血清型之间交叉免疫保护性差，使得疫苗免疫错综复杂不能起到很好的保护作用，到目前为止尚未有有效的疫苗出现。早期诊断，早期预防，是防止本病爆发的最有效方法。所以，必须加强我国BT尤其是BTV8的相关工作的研究，做好必要的技术储备。 

BTV属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）环状病毒属（Orbivirus），其基因组为分节段的线性双链RNA，包含10个节段，大小约为19kb，共编码11种蛋白。BTV病毒粒子有三层衣壳蛋白组成，由L2基因编码的VP2是BTV外壳蛋白的主要成分之一。VP2为血清型特异性抗原，能刺激中和抗体产生，也是病毒血凝素抗原。BTV8-VP2长961个氨基酸，不同BTV血清型之间VP2序列差异最大。将BTV的24个血清型标准株的L2基因序列进行系统发育树比较，发现编码VP2的L2基因序列的变异与BTV血清型之间有密切联系。这表明VP2在决定BTV血清型方面起重要作用，是建立BTV血清型鉴别诊断的理想抗原。所以，筛选出一株可以分泌抗BTV8-VP2蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定出其所分泌的单克隆抗体所识别的BTV8-VP2蛋白特异性B细胞表位多肽对BTV8的诊断、预防具有重要作用，并为BTV8亚单位疫苗的研制奠定了基础。 

发明内容

本发明目的之一是提供一株分泌BTV8-VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株； 

本发明目的之二是提供一种由上述杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体，该单克隆抗体可与BTV8-VP2蛋白发生特异性反应，而与其他血清型VP2蛋白不反应； 

本发明目的之三是鉴定一个BTV8-VP2蛋白的特异性B细胞表位多肽。 

本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的：