[发明专利]醋酸胸腺五肽规模化制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽制备领域，特别涉及醋酸胸腺五肽规模化制备方法。

背景技术

胸腺五肽是胸腺分泌物的一种，胸腺生成素Ⅱ的有效部分。胸腺生成素Ⅱ是从胸腺激素中分离出来的单一多肽化合物，由49个氨基酸组成，而其中由5个氨基酸组成的肽链片段，却有着与胸腺生成素II相同的全部生理功能，所以就把这个五肽片段称为胸腺五肽。

胸腺五肽由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸、酪氨酸五种氨基酸组成。其化学名称为N-〔N-〔N-〔NL-精氨酰-L-赖氨酰〕-L-α-天冬氨酰〕-L-缬氨酰〕-L-酪氨酸。分子式：C₃₀H₄₉N₉O₉。分子量：679.77。

胸腺五肽的作用之一是诱导T细胞分化。它可选择性地诱导Thy-1-的前胸腺细胞转化为Thy-1+的T细胞。其T细胞分化作用由胞内cAMP水平升高介导。胸腺五肽的另一基本作用是对成熟外周血T细胞的特异受体结合，使胞内cAMP水平上升，从而诱发一系列胞内反应，这也是它免疫调节功能的基础。在正常机体状态下胸腺五肽显现免疫刺激作用，能显著增高脾淋巴细胞的E玫瑰花结形成率及转化率，对免疫应答的初次或再次反应的不同阶段都有增强作用，能增多IgM类型和IgG或IgA类型的抗体形成细胞。胸腺五肽还可增强巨噬细胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白细胞的酶和吞噬功能，升高循环抗体含量，增强红细胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8阳性细胞，使专一的Tc细胞寿命维持更长时间，同时也可活化Th细胞，诱导Ts细胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治疗作用与它增进TC细胞活性相关。在抗感染免疫中适量胸腺五肽可明显增加干扰素的产生。诱导和促进T细胞分化成熟；调节T淋巴细胞亚群比例使CD4/CD8趋于正常；增强巨噬细胞吞噬功能；增强红细胞免疫功能；提高自然杀伤细胞的活力；提高白介素-2的产生水平与受体表达水平；增强外周血单核细胞γ干扰素的产生；增强血清中SOD活性。可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者；乙型肝炎的治疗；重大外科手术及严重感染；自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎，红斑狼疮；Ⅱ型糖尿病、更年期综合征；年老体衰免疫功能低下者。

目前胸腺五肽的制备方法成本较高，特别是氨基酸和溶剂的利用率较低，尤其是液相法合成中溶剂使用量大，规模化生产对场地和人员的要求较高，难以实现工业化大生产。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种醋酸胸腺五肽规模化制备方法。该制备方法利用多批次固相合成，设计了合适套用规模，能够利用收集密闭保存的反应多余氨基酸，氨基酸利用率达到67.8%以上。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种醋酸胸腺五肽的规模化制备方法，包括如下步骤：

步骤1：获得Tyr-树脂；

步骤2：以氨基酸为第一原料，取Tyr-树脂经第一逐步偶联，逐步偶联Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，进行第一批次固相合成，获得第一肽片段-树脂，分别收集逐步偶联的反应液作为第一反应液，备用；

步骤3：以第一反应液为第二原料，取Tyr-树脂经第二逐步偶联，逐步偶联Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，进行第二批次固相合成，获得第二肽片段-树脂树脂，分别收集第二逐步偶联的反应液作为第二反应液，备用；

步骤4：取所述第二反应液并补充氨基酸作为第三原料，取Tyr-树脂经第三逐步偶联，逐步偶联Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，进行第三批次固相合成，获得第三肽片段-树脂；

步骤5：合并第一肽片段-树脂、第二肽片段-树脂和第三肽片段-树脂，裂解，纯化、成盐即得；

第一批次固相合成、第二批次固相合成与第三批次固相合成的物质的量的比为1:0.5～0.8:0.3～0.5。

作为优选，本发明提供的醋酸胸腺五肽的规模化制备方法中，步骤4中补充氨基酸的物质的量与第三批次固相合成的物质的量的比为1:1。

作为优选，本发明提供的醋酸胸腺五肽的规模化制备方法中，步骤1中第一原料的物质的量与第一批次固相合成的物质的量的比为2～5:1。