[发明专利]一种人源抗TLR4抗体Fab及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属生物制药领域，涉及人源噬菌体抗体库及1株抗TLR4基因工程抗体Fab及其重链可变区基因、轻链可变区基因与其所编码的蛋白，以及所述蛋白及其衍生物在炎症反应中的作用。

背景技术

感染性休克也称败血症性休克或中毒性休克。是由病原微生物及其毒素在人体引起的一种微循环障碍状态，导致组织缺氧、代谢紊乱、细胞损害甚至多器官功能衰竭。其特点是病情重、进展快、死亡率高。感染性休克最重要的发病机制主要与感染的细菌及其内毒素引起的一系列炎症因子有关。脂多糖是细菌内毒素（endotoxin）的主要成分，是革兰氏阴性细菌胞壁的成分。内毒素有多种生物活性，进入人体血液可造成内毒素血症(ETM)，可引起多种病理生理过程变化如发热、休克、弥漫性血管内凝血和粒细胞减少等，甚至造成严重后果如呼吸窘迫综合症(ARDS)，急性肾衰竭(ARF)，甚至多器官功能衰竭(MOF)等多种疾病，最终可因内毒素休克死亡。重型肝病时，由于肝脏的解毒功能严重受损，存在严重的感染、内毒素血症，从而加重肝病的进程。

TLR4 是Toll 样受体家族的成员之一，也是一种模式识别受体（patternrecognition receptors, PRRs），能够识别微生物进化过程中的一些保守结构PAMP (pathogen-associatedmolecular pattern, PAMP)，如LPS，被认为是内毒素激活炎症反应的关键。TLR4 在体内和体外对LPS 效应起着主要感受器的作用，并调节细胞的促炎症因子表达和组织对损伤的炎症反应。近年来，对LPS 的信号转导与TLR4 的关系的研究取得了重大进展。TLR4属于Ⅰ型跨膜受体蛋白；胞外区由富含亮氨酸的重复序列LRR(leucine-rich repeats)组成，胞内区与IL-1 受体胞内区相似，称为TIR(Toll/IL-1 receptor)区。TLR4 广泛表达在各种淋巴细胞表面，其中既包括非特异免疫细胞如巨噬细胞、中型粒细胞和肥大细胞，又包括介导特异免疫反应的T 淋巴细胞和B 淋巴细胞，活化TLR4 将诱导产生一系列的炎症介质，从而产生强有力的炎症反应。LPS 在细胞外被识别后导致TLR4 受体寡聚化激活, 将LPS 刺激信号向细胞内转导, 通过MyD88 依赖和非MyD88 依赖的2 条途径触发一系列的信号激联反应, 诱导NF-κB、AP-1 和IRF-3等转录因子磷酸化和核转位，上调TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8 和IFN-γ 等细胞因子的表达, 最后启动炎症反应。TLR4 信号转导通路在这一过程中起着极其重要的作用，可能会成为治疗内毒素血症的重要靶点。

TLR4 是内毒素发挥生物学效应的瓶颈和内毒素瀑布效应的限速步骤。阻断TLR4 对内毒素信号的传导，是控制内毒素生物效应的最为有效的手段。目前虽然有对TLR4进行的相关研究，但是尚无开发出针对人源TLR4的抗体，从而不能有效控制内毒素的生物效应，因此对于TLR4介导的各种炎症反应，没有得到十分有效的抑制。

发明内容

解决的技术问题：本发明目的在于针对现有技术的不足提供一种抗TLR4的基因工程抗体Fab，及其轻链、Fd链CDR序列，轻链、Fd链可变区氨基酸序列，轻链、Fd链氨基酸序列，轻链、Fd链可变区核酸序列以及轻链、Fd链核酸序列，以及制备人源抗TLR4抗体Fab的方法，及其在抑制TLR4介导的炎症反应中的用途。

技术方案：

一种人源抗TLR4抗体Fab，轻链的互补决定区CDR具有以下的CDR氨基酸序列：

SEQ ID NO.1 所示的CDR1;

SEQ ID NO.2 所示的CDR2；

SEQ ID NO.3 所示的CDR3;

并且所述抗体的Fd链的互补决定区CDR具有以下的CDR氨基酸序列：

SEQ ID NO.4 所示的CDR4;

SEQ ID NO.5 所示的CDR5；

SEQ ID NO.6 所示的CDR6。

一种人源抗TLR4抗体Fab，其中抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7 所示，抗体Fd链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

所述的人源抗TLR4抗体Fab，轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示，Fd链氨基酸序列为SEQ ID NO.10所示。

一种编码人源抗TLR4抗体Fab的DNA分子，其中轻链可变区核酸序列为SEQ ID NO.11所示，Fd链可变区核酸序列为SEQ ID NO.12所示。