[发明专利]植物种子DNA快速提取试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种DNA提取试剂盒，尤其涉及植物种子DNA的快速提取试剂盒及其应用，属于植物种子DNA的提取领域。 

背景技术

在分子生物学研究中，高质量的DNA的提取是其下游生物学应用的关键。随着分子生物学的发展，多种植物材料的DNA的提取方法已建立，包括：CTAB法、SDS法、PVP法、尿素法或高盐低pH法等。不同植物材料中，蛋白质、多糖、酚类物质的含量差别较大，分离或提纯获得高质量的DNA存在一定的难度。针对不同植物材料的细胞壁和细胞内容物存在的差异，采用适宜的植物DNA的提取方法，才能保证DNA的提取质量。 

植物种子中通常含有大量的多糖、蛋白质或脂类物质（黄小丹，张云贵，应铁进.高质量植物基因组的提取［J］.植物生理学通讯，2006,42（2）：311-314），有效去除这些物质是DNA分离过程中最重要也是最难的环节之一。 

目前，对植物种子DNA大多采取液氮研磨后用CTAB法、SDS法或高盐低pH法等提取基因组DNA。但是这些提取方法大多存在DNA的得率较低、杂质较多（含有较多的蛋白质、脂类物质、多糖等杂质）的缺陷，有待改进。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种植物种子DNA快速提取试剂盒。 

本发明的目的之二是将所述的植物种子DNA快速提取试剂盒应用于提取植物种子DNA。 

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的： 

一种植物种子DNA快速提取试剂盒，包括：CTAB裂解液，硅基质膜DNA吸附柱，RNA酶，过柱缓冲液，漂洗液1，漂洗液2和洗脱缓冲液；其中，所述过柱缓冲液的成分包括：2.5-7.0M盐酸胍，0.05M Tris-HCl，0.01M EDTA；其中pH值为4.0-7.0。 

本发明通过大量的实验发现，采用硅基质膜DNA吸附柱对DNA粗提液 进行纯化时，虽然能够有效提高DNA的纯度，但是DNA的得率较低，其产量难以满足后续的分子生物学实验需要。 

本发明发现，过柱缓冲液中盐酸胍的浓度以及pH值高低对于DNA的得率乃至纯度有非常显著的影响。为了提高DNA的得率和纯度，本发明对过柱缓冲液中盐酸胍的浓度以及pH值进行了优化，以最大限度的改善DNA的得率和纯度。 

本发明通过大量的优化实验发现，过柱缓冲液中盐酸胍的浓度在4.0-5.0M的范围内，pH值为5.0-6.0时，不仅具有较高的DNA得率，而且DNA纯度较高；本发明非常惊奇的发现，当盐酸胍的浓度为4.5M，pH值为5.5时，DNA产物的得率相比于其它条件的得率至少高了17个百分点，且DNA产物的纯度也最高；因此，本发明所述的过柱缓冲液中盐酸胍的浓度最优选为4.5M，pH值最优选为5.5。 

本发明所述“CTAB裂解液”可以是现有技术中任何一种的CTAB裂解液，包括文献中报道的各种改进的CTAB裂解液；作为参考，所述的“CTAB裂解液”的成分包括：1.4M NaCl，2%CTAB，0.1M Tris-HCl pH8.0，0.02M EDTA。 

本发明所述“漂洗液1”或“漂洗液1”可以是现有技术中任何一种用于漂洗硅基质膜DNA吸附柱的漂洗液；优选的，所述“漂洗液1”的成分包括：3M NaAC pH5.2，无水乙醇；其中，NaAc和无水乙醇的体积比为3:7；所述“漂洗液2”的成份成分包括：0.1M Tris-HCl pH7.0，无水乙醇；其中，Tris-HCl和无水乙醇的体积比为3:7。 

本发明所述的洗脱缓冲液可以为TE缓冲液或去离子水。 

本发明的另一目的是将所植物种子DNA快速提取试剂盒应用于快速提取植物材料DNA，包括： 

（1）将植物材料研磨成粉后加入CTAB裂解液和RNA酶进行抽提，得到DNA粗提液； 

（2）将DNA粗提液与过柱缓冲液混合，得到混合液； 

（3）将混合液上硅基质膜DNA吸附柱，离心；分别用漂洗液1和漂洗液2漂洗吸附柱； 

（4）用洗脱缓冲液洗脱吸附柱，收集洗脱液，即得。 

其中，所述的植物材料是作物种子；优选为棉花、水稻、玉米或大豆的 种子。 

作为参考，本发明试剂盒的组成可参照表1的成分及用量进行组装。 

表1试剂盒的组成和用量 

本发明试剂盒中所用的各种原料或材料都可以从生物试剂公司购买得到。