[发明专利]大肠杆菌混合溶组织内阿米巴在制备治疗肝癌实体瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及治疗肝恶性实体瘤的生物治疗，特别是大肠杆菌混合溶组织内阿米巴在制备治疗肝癌实体瘤药物中的应用。 

背景技术

肝癌素有癌中之王的称号,20世纪90年代原发性肝癌已上升为恶性肿瘤的第2位，全球每年约有31万患者，中国每年有13万人死于肝癌，占全球肝癌死亡总数的42%。 

目前，原发性肝癌的治疗仍采用以手术为主的综合治疗，包括化疗、物理疗法（放射、超声、热疗、低温技术）、生物治疗、中医中药治疗等。现代分子生物学技术和基因工程技术的迅速发展和生物反应调节剂(biological response modifier，BRM)理论的提出为生物治疗开辟了全新的领域。生物治疗已成为继手术、放疗、化疗后肿瘤治疗的第四种模式，并显示出了良好的应用前景。目前，生物治疗主要包括：免疫治疗、基因治疗、抗血管生成治疗、内分泌治疗等。但是,上述治疗方法仍存在毒副作用大、条件要求高、疗效不满意等问题：如外科切除虽然是目前最有效的治疗手段，但其5年生存率经过几十年努力也未能继续前进一步，仍停滞在7%。肝移植作为一种肝癌根治方法，既不用考虑剩余肝组织的代偿能力而完整切除肿瘤，又能避免残余病肝组织的恶变可能，是目前最彻底、最有效的治疗手段，由于移植适应证的扩大将使大量的肝癌患者纳入移植队列，势必对器官资源的分配产生重要影响。由于肝源的缺乏，等待时间的延长导致候选患者退出率达20％。 

溶组织内阿米巴（Entamoeba histolytica）可寄生人类大肠，滋养体侵犯宿主肠粘膜可以引起阿米巴性结肠炎和肠外脓肿。溶组织内阿米巴最重要的特性是以接触依赖的方式杀伤宿主细胞，其中半乳糖/乙酰氨基半乳糖可抑制性凝集素（Gal/GalNAc）具有附着宿主细胞的作用,与虫体的吸附和细胞毒性有关。阿米巴穿孔素（amoeba pores）则是一组存在于滋养体胞质颗粒中的小分子蛋白。滋养体与靶细胞接触或侵入组织时可注入这些微孔形成蛋白，在靶细胞，例如肠壁细胞、肝细胞、免疫细胞，脂膜中形成离子通道，使细胞内钙离子浓度上升20倍之多，以致出现细胞毒性作用，使细胞在5分钟至15分钟内死亡。借助溶组织内阿米巴凝集素附着于宿主细胞，继而穿孔素使细胞出现毒性和细胞溶解作用，而另一主要蛋白半胱氨酸蛋白酶（cysteine proteinase，CP）可以降解细胞外基质蛋白和溶解宿主细胞，参与溶组织内阿米巴侵袭和破坏组织。由于CP的存在，阿米巴显示很强的蛋白水解酶活性，其属于木瓜蛋白酶大家族。。实验证实:溶组织内阿米巴不仅能杀伤正常组织细胞,而且也能吞噬、杀灭肿瘤细胞。我们以KB细胞为靶细胞,采取混合培养方法,在显微镜下动态观察了不同时 间段溶组织内阿米巴对KB细胞的吞噬杀灭过程,1×10⁴虫体/ml在18小时内可将浓度为1×10⁶/ml KB细胞全部杀灭。在我们前期工作中证实：溶组织内阿米巴SAW755CR（强毒株）与Caco-2cell(人结肠癌细胞);Hela cell(人宫颈癌细胞);HepG-2cell（人肝癌细胞）共同孵育2小时，肿瘤细胞可被杀灭约50%。 

在体内，滋养体可藉其溶解破坏之能力，随血流进入门静脉系统，首先至肝脏，因肝小叶微静脉有过滤作用而停留在微静脉末端。如果侵入肝脏的原虫数量不多，且人体抵抗力强，可将原虫消灭而不造成损害。若机体抵抗力下降，或肝脏内环境发生改变，侵入肝脏的阿米巴滋养体可引起微静脉及其周围组织的炎性反应，滋养体迅速繁殖，形成微静脉栓塞，导致该处肝组织缺氧、缺血，滋养体从被破坏的血管内逸出，引起肝组织的灶性坏死、液化而成为微小脓肿，相邻之脓肿互相融合，最后形成临床上的大脓肿(amoebic liver abscess)。发明内容 

本发明的目的是要提供大肠杆菌配合溶组织内阿米巴在制备治疗肝癌实体瘤药物中的应用。具体地说是将大肠杆菌与溶组织内阿米巴滋养体按比例混合制成治疗肝癌恶性实体瘤的细胞悬液制剂药物。 

实现本发明目的的技术方案是：