[发明专利]一种分离富集水环境中三种头孢类抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水环境中痕量头孢类抗生素的检测前处理方法，具体地说是一种同时分离富集地表水和城市污水中三种痕量的头孢类抗生素(头孢西丁、头孢拉定和头孢哌酮)的方法。 

背景技术

头孢类抗生素(Cephalosporins)是以冠头孢菌培养得到的天然头孢菌素C作为原料，经半合成改造其侧链而得到的一类抗生素。头孢类抗生素与青霉素相比具有抗菌谱较广，耐青霉素酶，疗效高、毒性低，过敏反应少等优点，在抗感染治疗中占有十分重要的地位。头孢菌素已从第一代发展到第四代，其抗菌范围和抗菌活性也不断扩大和增强。 

据调查，近年来，我国医院中头孢类抗生素代替青霉素类抗生素，使用量占所有抗菌药的比例已超过45％，国内头孢类抗生素的增长速度达到30％左右，已经超过医药产品平均增长速度。在目前医院销售排名前20位药品中，头孢类抗生素及各类复合抗生素占一半以上。头孢类抗生素的滥用产生了很多耐药性致病菌，如绿脓杆菌对阿莫西林，头孢呋辛钠等8种抗生素的耐药性达100％；肺炎克雷伯菌对头孢呋辛钠、头孢他啶等16种抗生素的耐药性高达52％～100％。而耐药菌的产生，使难治性感染越来越多 

地表水和城市污水中的抗生素类药物残留主要来自于医院、养殖场和制药企业等废水的排放。研究结果表明，环境水样中的头孢类抗生素含量甚微，仅为ng/L或μg/L级。因此，检测水环境中痕量头孢类抗生素要求水样的预处理方法具有较高的富集倍数和较好的重复性；同时，预处理方法应该满足操作简单，耗时较少，使用药品环境友好，使用量少等要求。环境水样中提取抗生素的方法较多，包括液液萃取、冻干法、固相萃取、固相微萃取和分子印迹技术等。其中固相萃取技术由于其操作简便，处理样品量大，富集效率高，外来污染少，可重复性强，且可应用于自动装置而 成为富集抗生素等微污染物首选方式。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离富集水环境中三种头孢类抗生素的方法。 

为实现上述目的，本发明提供的分离富集水环境中三种头孢类抗生素的方法，包括如下步骤： 

(1)水样的预处理 

用酸将水样pH调至2-4，过滤，得到预处理后的水样； 

(2)分离富集 

依次用丙酮、甲醇、含乙酸铵的甲酸水溶液活化HLB固相萃取柱，最后加超纯水保持HLB固相萃取柱中树脂处于活化状态，取水样过柱； 

富集完成后，将HLB固相萃取柱在氮气保护下干燥，再用洗脱液洗脱HLB固相萃取柱，收集洗脱液在氮气流下吹干，加入乙腈溶解残留物，漩涡混合，待测； 

(3)定量检测三种头孢类抗生素的浓度； 

所述三种头孢类抗生素为：头孢西丁、头孢拉定和头孢哌酮。 

所述的检测方法，其中，步骤1中水样过滤是用0.47μm的GF/F滤膜。 

所述的检测方法，其中，步骤1中是加入盐酸或硫酸调节水样pH。 

所述的检测方法，其中，步骤2中甲酸水溶液含有体积比0.1％的乙酸铵。 

所述的检测方法，其中，步骤2中的水样过柱控制流速为3.0-5.0mL/min。 

所述的检测方法，其中，步骤2中洗脱HLB固相萃取柱的洗脱液流速小于1.0mL/min。 

所述的检测方法，其中，步骤2中的洗脱液为含有体积比1％甲酸的甲醇溶液。 

所述的检测方法，其中，步骤3是采用液相色谱-串联质谱法检测三种头孢类抗生素的浓度。 

本发明采用高效液相色谱-串联质谱联用对水体中三种头孢类抗生素同时进行定量测定，具有以下优点： 

1)该方法处理水样过程所用的试剂低毒，使用量少，环境友好。 

2)该方法对水样的富集倍数高达2500倍，同时富集效率较高，回收率在69.0％～100.4％之间。 

3)该方法操作较为简单，可重复性强，同一批样品的相对标准偏差低于5％，满足预处理方法要求。 

4)该方法能够同时富集同一类抗生素的多种药物适用范围较广，使用现代分析仪器检测用时较少，检测限低，线性范围宽，从10μg/L-1000μg/L，准确度较高，样品检测效率高。 

附图说明

图1为本发明100μg/L的三种头孢类抗生素混合标准品溶液的离子流图，出峰顺序为头孢西丁4.32min；头孢拉定4.45min头孢哌酮5.64min。 

图2为头孢西丁定量子离子标准曲线。 

图3为头孢拉定定量子离子标准曲线。 

图4为头孢哌酮定量子离子标准曲线。