[发明专利]一种用于人乳腺癌特异性甲基化检测的引物、探针及其应用

权利要求书

1.一种用于人乳腺癌特异性甲基化检测的引物和探针，其特征在于所述的引物和探针分别具有如下所示序列：

正向引物：5-AGGYGGGAGGTTTATAGAGGG-3

反向引物：5-AACTCCCRACRCRACTCATA-3

探针：5-AGGCGCGTCGCGTT-3。

2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于用于人乳腺癌特异性甲基化检测时，包括如下步骤：

（1）将待检组织DNA进行硫化处理，取硫化后DNA，作为RT-PCR的反应模板；

（2）按RT-PCR反应总体积的1/10～1/20体积比例加入模板，加入正向引物，反向引物和探针，使得正向引物，反向引物和探针在RT-PCR反应体系中的终浓度分别为0.25μM、0.25μM和0.2μM，按常规方法及剂量加入其它试剂；

（3）95℃预变性，3min；95℃变性，10s，60℃复性及延伸，30s，循环30次；

（4）荧光定量检测结果：如果在阈值2043.06507以上出现特异性扩增曲线，结果为阳性；反之，结果为阴性。

3.一种用于诊断人乳腺癌的Real-time PCR甲基化检测试剂盒，其特征在于包括权利要求1或2所述的特异性引物和探针。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于还包括10xPCR缓冲液，50mMMgCl₂，10μM dNTPs，5U/μl Taq酶。

5.权利要求1或2所述的特异性引物和探针在制备检测人乳腺癌试剂中的应用。

6.权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测人乳腺癌试剂中的应用。