[发明专利]一种载脂蛋白B纳米抗体、其编码序列及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及一种针对于载脂蛋白B的纳米抗体。

背景技术

载脂蛋白（apolipoprotein，apo）是血浆脂蛋白中的蛋白质，其基本功能是运载脂类。载脂蛋白B（apoB）存在于低密度脂蛋白的表面，细胞识别和摄取LDL主要通过识别载脂蛋白B实现。apoB由于氨基酸组成的差异，可分为以下亚类：apoB48和apoB100。apoB48是乳糜微粒（CM）的载脂蛋白之一；apoB100是极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）的载脂蛋白之一。载脂蛋白B增多时，即使LDL水平正常，也可使冠心病发病率增高。apoB是LDL（低密度脂蛋白）的主要蛋白质，因此，血清中apoB主要代表LDL水平，与LDL－C成显著正相关。在流行病学与临床研究中已确认，高apoB是冠心病的危险因素。在冠心病高血症的药物干预实验中，表明降低apoB可以减少冠心病及促进粥样斑块的消退。

目前市场上用于检测载脂蛋白B的试剂盒(免疫比浊法)的工作原理主要通过一种针对于载脂蛋白B的抗体来实现的，但是这种传统意义上的抗体稳定性差、灵敏度低、生产成本高，所有因素均限制了对于载脂蛋白B的检测。1993年比利时科学家首次在Nature报道：在骆驼血液中的抗体，有一半没有轻链，而且更让人惊喜的是，这些缺失轻链的“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧密结合，这种抗体只包含一个重链可变区和两个常规的CH2与CH3区，更重要的是单独克隆并表达出来的VHH区具有很好的结构稳定性与抗原结合活性，分子量只是普通抗体的1/10，所以VHH也称Nanobody（纳米抗体）；与此同时纳米抗体化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，容易偶联其他分子，因此应用纳米抗体技术研发载脂蛋白B检测试剂具有广阔的前景。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种针对载脂蛋白B表位的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及该纳米抗体在制备检测的应用。

技术方案：为实现上述目的，本发明的第一方面，提供了一种载脂蛋白B的纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列中任意一种：SEQ ID NO：1所示的FR1，SEQ ID NO：2所示的FR2，SEQ ID NO：3所示的FR3，SEQ ID NO：4所示的FR4；或SEQ ID NO：5所示的FR1，SEQ ID NO：6所示的FR2，SEQ ID NO：7所示的FR3，SEQ ID NO：8所示的FR4；

所述互补决定区CDR选自下组的CDR的氨基酸序列中任意一种：

SEQ ID NO：9所示的CDR1，SEQ ID NO：10所示的CDR2，SEQ ID NO：11所示的CDR3；或SEQ ID NO：12所示的CDR1，SEQ ID NO：13所示的CDR2，SEQ ID NO：14所示的CDR3；

优选地，所述的载脂蛋白B的纳米抗体的VHH链，它具有SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列。

本发明第二方面，一种载脂蛋白B纳米抗体，它针对载脂蛋白B表位的纳米抗体，包括两条具有SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示氨基酸序列的VHH链。

本发明第三方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：本发明所述的载脂蛋白B的纳米抗体的VHH链，或本发明所述的载脂蛋白B纳米抗体。

优选地，所述的DNA分子，其特征在于，它具有选自下组的DNA序列：SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18

本发明的第四方面，提供了一种表达载体，它含SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18

所示的核苷酸序列。

本发明的第五方面，提供了一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的表达载体。

本发明的第六方面，提供了本发明所述的载脂蛋白B纳米抗体用于检测载脂蛋白B的用途。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点如下：本发明将血液中提取的载脂蛋白B免疫新疆双峰驼，随后利用该骆驼外周血淋巴细胞建立了针对于载脂蛋白B的纳米抗体基因库，试验中将载脂蛋白B偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的纳米抗体基因库（骆驼重链抗体噬菌体展示基因库），从而获得了针对载脂蛋白B特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

附图说明