[发明专利]一种抗凝血丝素材料及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗凝血材料及其制备方法，尤其是一种抗凝血丝素材料及其制备方法。

背景技术

心血管疾病已成为人类的头号杀手，严重威胁着人类身体健康。人工血管等与血液接触材料是目前生物医用材料及临床最迫切需求的材料。如目前医学上应用的人工血管产品主要是由涤纶、膨体聚四氟乙烯等合成材料制成的，在研发大中口径人工血管方面具有极大的应用，但这些合成材料细胞相容性差，不利于内皮化，容易形成血栓，远期通畅率较差，影响组织愈合。因此需要开发一种组织相容性好、与组织修复匹配的人工血管材料。

家蚕蚕丝是由家蚕合成与分泌的天然动物蛋白，来源广泛，丝素蛋白即丝芯蛋白，是蚕丝中主要的组成部分，约占蚕丝质量的70%～80%，其余为丝胶蛋白及少量的茧丝蜡、灰分、碳水化合物等。可通过蚕丝脱胶获取丝素。丝素蛋白具有良好的生物相容性，由20种人体可吸收的氨基酸组成，最终降解产物为氨基酸或小肽，易被细胞吸收或吞噬，不会引起明显的免疫反应。已有大量的文献研究表明丝素蛋白材料能够支持多种细胞的生长，在组织工程材料研究方面越来越深入，并取得了突破性的进展，近来，应用于血管组织工程上也越来越受到关注，我们已经开展了多年的蚕丝人工血管的构建及其生物学性能研究。

对于与血液直接接触的生物材料来说，不仅要具有良好的生物相容性，最重要是血液相容性，其中最主要的问题在于血液与材料接触后会产生凝固，因此抗凝血性研究成为了血液相容性研究的焦点。丝素蛋白用于构建小口径人工血管具有广阔的应用前景，为了提高丝素材料的抗凝血性能，国内外一些研究人员也关注到了改善丝素蛋白材料的抗凝血性能研究。

在本发明作出之前，对丝素蛋白的抗凝血改性主要报导了接枝具有抗凝的高分子及硫酸化或肝素化方法。如She等将肝素在温和的条件下加入丝素／壳聚糖支架中，增强了抗凝性（Polymer International, 2010, 59(1):55-61）；Liu等利用静电纺丝技术将氯磺酸处理过的丝素蛋白制成丝素纳米支架，硫酸化纳米丝素支架的抗凝血性显著增强（Biomaterials, 2011, 32(15):3784-3793）；Wang等利用静电纺丝技术制备了肝素改性丝素纳米材料，体外凝血测试结果表明改性后丝素纳米材料的抗凝血性远高于纯丝素（International Journal of Biological Macromolecules，2011， 48(2):345-353）；用氯磺酸制备的硫酸化丝素蛋白的抗凝血活性要比硫酸制备的硫酸化丝素大大提高（Biomaterials, 2004, 25(3)：377-383），但远远不及肝素。肝素改性丝素蛋白材料抗凝血性研究已存在知识产权（如抗凝血真皮支架的制备，申请号:CN200910223207.4；纳米纤维人工血管及制备方法，申请号:CN200910228843.6等），所以引入肝素是本发明作出前丝素材料抗凝血性改性的主要方法，但肝素属于一种凝血酶间接抑制剂，抗凝作用要依赖抗凝血酶和特定的辅因子，所以即使材料中共混或键合的肝素不一定能或都能发挥抗凝作用。

发明内容

本发明目的是：提供一种含有具有直接抗凝血功能成分的抗凝血丝素材料及其制备方法。

本发明的技术方案是：一种抗凝血丝素材料，其组分包括丝素蛋白，其特征在于，还包括水蛭素，该水蛭素直接与活化的丝素蛋白通过酰胺键共价结合。

优选地，所述水蛭素与所述丝素蛋白的质量比为0.5 ~20：10000。

更优选地，所述水蛭素与所述丝素蛋白的质量比为2~5：10000。

一种抗凝血丝素材料的制备方法，步骤如下：

（1）制备浓度为4~20%的丝素蛋白溶液；

（2）将N-羟基丁二酰亚胺溶解于步骤（1）所述的丝素蛋白溶液中，搅拌均匀后静置，再加入水蛭素搅拌均匀得到混合溶液；

（3）将步骤（2）得到的混合溶液固化后，用甲醇或乙醇溶液浸渍处理，再浸泡于去离子水中，最后取出风干得到抗凝血丝素材料。

优选地，所述步骤（1）中采用蚕丝或茧壳进行脱胶、溶解后，灌注于透析袋内，然后用去离子水透析，最后过滤浓缩得到浓度为4~20%的丝素蛋白溶液。