[发明专利]一种抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体是一种抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达的siRNA及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达，用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达，它不但是研究基因功能的一种有力工具，而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。

Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）是机体通过识别病原微生物并激活细胞分泌细胞因子和协同刺激因子，产生免疫防御的天然免疫受体，在宿主的天然免疫和获得性免疫中起到了桥梁的作用。迄今为止人类TLR家族至少包括11个成员，尽管TLR家族成员具有相似的结构，但不同的TLR能够分别识别不同的配体，其中TLR2的识别范围广泛。TLR2的配体主要包括G+菌的胞壁成分、细菌、结核分枝杆菌、螺旋体的脂蛋白和真菌。虽然TLR2主要识别革兰阳性菌的标记蛋白，但越来越多的研究表明TLR2也参与了对病毒成分的识别。野生型麻疹病毒(measles vfrus,MV)通过它的血凝蛋白活化TLR2，进而激活NF-κB，诱导炎症细胞因子分泌和细胞表面共刺激分子CDl50的表达。Compton等证实，人巨细胞病毒(human cytomegaJoviru&HCMV)能以TLR2依赖的方式活化NF-κB，诱导炎症细胞因子的分泌。综上所述，TLR2作为一类PRR，参与了天然免疫系统对病毒的识别，在机体通过免疫应答抗病毒感染中发挥重要的作用。

虽然RNA干扰技术可有效、特异地下调细胞中基因的表达，并能够应用于基因治疗技术，而TLR2能够在机体通过免疫应答抗病毒感染中发挥重要的作用。然而，目前尚未有人针对TLR2设计siRNA来抑制TLR2的表达，从而达到治疗某种细菌感染性疾病或病毒性疾病的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达的siRNA及其应用，通过设计并合成小分子RNA干扰来抑制人-单核巨噬细胞TLR2的表达，且设计合成的小分子RNA能够应用于病毒性或细菌感染性疾病的基因治疗中。

本发明实现上述目的所采取的技术方案是：

一种抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达的siRNA，所述的siRNA的正义链序列为5’-GGAUCCUCGUGGAUAUCAAUU-3’，反义链序列为3’-UU CCUAGGAGCACCUAUAGUU-5’。

本发明还提供所述的siRNA在抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达中的应用。

本发明具有的有益效果是：所述的抑制人-单核巨噬细胞TLR2表达的siRNA具有重大价值，能够明显地抑制人-单核巨噬细胞的TLR2受体的表达，由于TLR2受体介导多种细菌或病毒感染，因此，本发明合成的siRNA能够应用于生物药物制剂，植入细菌或病毒感染的病人，则能够治疗细菌性或病毒性感染疾病，提高人体的免疫力。

附图说明

图1-图3均为10×10倍镜下观察到的分化后的人-单核巨噬细胞结构图。

图4为10×20倍镜下观察到的分化后的人-单核巨噬细胞结构图。

图5和图6为本发明所述的siRNA转染到分化的人-单核巨噬细胞后，人-单核巨噬细胞的TLR2表达的荧光定量曲线图。

图7为TLR2表达扩增后的电泳图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用到的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

试验材料如下：

siRNA合成：英骏生物技术有限公司。

人-单核巨噬细胞：从健康人外周血分离单核巨噬细胞，培养7-10天分化成巨噬细胞。

Lipofectamine2000：购自Invitrogen，Cat No：11668-019。

荧光定量PCR仪:购自美国伯乐公司，Cat No：CFX35。

逆转录试剂盒：TaKaRa公司，Cat No：DDR37

荧光定量试剂盒：TaKaRa公司，Cat No：DDR081