[发明专利]抗耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌肽MP1102、其制备方法及应用

权利要求书

1.抗耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌肽MP1102，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。

2.编码权利要求1所述抗菌肽MP1102的基因。

3.含有权利要求2所述基因的表达载体。

4.含有权利要求2所述基因或权利要求3所述表达载体的重组酵母菌。

5.一种制备权利要求1所述抗菌肽MP1102的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）基因表达框的设计：对抗菌肽MP1102的编码基因进行酵母偏爱密码子优化，在优化后的基因序列的N端插入信号肽切割位点kex2，将两个TAA终止密码子插入该序列的C端，并在两端分别添加XbaI、XhoI酶切位点，在酶切位点两端分别插入保护碱基，所得基因表达框的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；

2）重组酵母表达载体的构建：将SEQ ID No:3所示的基因经XbaI和XhoI双酶切后，与经过同样双酶切的pPICZαA载体连接，得到的重组酵母表达载体pPICZαA-MP1102；

3）重组酵母菌的制备：载体pPICZαA-MP1102经线性化后转化感受态毕赤酵母X-33，筛选出高水平表达抗菌肽MP1102的重组酵母菌；

4）抗菌肽MP1102的制备：对步骤3）中获得的重组酵母菌进行发酵培养，离心发酵液，收集上清，上清经纯化后即得抗菌肽MP1102。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4）中使用的发酵培养基配方以每升计为：葡萄糖45g、NH₄H₂PO₄50g、K₂SO₄20g、MgSO₄.7H₂O15g、KH₂PO₄6g、CaSO₄0.4g和KOH1.5g，以水配制。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4）中采用阳离子交换层析对上清进行纯化。

8.权利要求1所述抗菌肽MP1102在制备用于治疗耐药性金黄色葡萄球菌的药物中的应用。

9.一种用于治疗耐药性金黄色葡萄球菌的药物，其特征在于，其有效成分包括权利要求1所述的抗菌肽MP1102。

10.一种分泌表达权利要求1所述抗菌肽MP1102的重组酵母菌，其构建方法包括以下步骤：

1）对抗菌肽MP1102的编码基因进行酵母偏爱密码子优化，在优化后的基因序列的N端插入信号肽切割位点kex2，将两个TAA终止密码子插入该序列的C端，并在两端分别添加XbaI、XhoI酶切位点，在酶切位点两端分别插入保护碱基，所得基因表达框的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；

2）将SEQ ID No:3所示的基因经XbaI和XhoI双酶切后，与经过同样双酶切的pPICZαA载体连接，得到的重组酵母表达载体pPICZαA-MP1102；

3）载体pPICZαA-MP1102经线性化后转化感受态毕赤酵母X-33，即得分泌表达抗菌肽MP1102的重组酵母菌。