[发明专利]胰蛋白酶原-2检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种胰蛋白酶原-2胶乳增强透射免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；所述试剂Ⅰ的组分包括：生物缓冲剂、防腐剂、无机盐和水；试剂Ⅱ的组分包括：包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒、生物缓冲剂、防腐剂和水。

2.按照权利要求1所述的胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒，其特征在于：所述包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒的粒径为100-300nm，优选为150-250nm，更优选为180-220nm，最优选为200nm。

3.按照权利要求1或2所述的胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒，其特征在于：所述胰蛋白酶原-2抗体包被胶乳颗粒的方法为化学交联法。

4.按照权利要求3所述的胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒，其特征在于，所述化学交联法包括以下步骤：

（1）胶乳溶液的配制：用2-（N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液分散胶乳颗粒，得到胶乳溶液；

（2）向胶乳溶液中依次加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺得到混合溶液；将混合溶液搅拌反应后，反应产物离心，弃上清，将沉淀洗涤后在去离子水中悬浮，得到胶乳微球溶液；

（3）将胰蛋白酶原-2单克隆或多克隆抗体溶解于2-（N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中，得到胰蛋白酶原-2抗体溶液；

（4）将胰蛋白酶原-2抗体溶液与胶乳微球溶液混合均匀，搅拌反应；反应完成后，向反应溶液中加入乙醇胺，搅拌反应，将反应产物离心，弃上清，洗涤沉淀，即得。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（1）中用0.01-0.1mol/L2-（N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液分散胶乳颗粒，得到胶乳溶液；按W/V计，胶乳微球的终浓度为0.3-5%；

步骤（2）中N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺在混合溶液中的终浓度分别为0.05-1mg/mL和0.1-2mg/mL；按W/V计，所述胶乳微球的终浓度为0.3-5%；

步骤（3）中将胰蛋白酶原-2单克隆或多克隆抗体溶解于50-100mmol/L2-（N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中，得到胰蛋白酶原-2抗体溶液，抗体的终浓度为0.5-2mg/mL。

6.按照权利要求1所述的胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒，其特征在于：所述的生物缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷；所述的生物防腐剂为Proclin-300；所述的无机盐为氯化钠。

7.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1升试剂Ⅰ中各组分的用量为：生物缓冲剂为2-50g，防腐剂0.25-3mL，无机盐2-25g；优选的，每1升试剂Ⅰ中各组分的用量为：生物缓冲剂为5-25g，防腐剂0.5-1mL，无机盐5-15g；更优选的，每1升试剂Ⅰ中各组分的用量为：生物缓冲剂为12g，防腐剂0.6mL，无机盐9g。

8.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1升试剂Ⅱ中各组分的用量为：包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒0.5-4g，生物缓冲剂2-50g，防腐剂0.25-3mL；优选的，每1升试剂Ⅱ中各组分的用量为：包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒0.8-3g，生物缓冲剂5-25g，防腐剂0.5-1mL；更优选的，每1升试剂Ⅱ中各组分的用量为：包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒1.7g，生物缓冲剂12g，防腐剂0.7mL。

9.按照权利要求1-3任何一项所述的检测试剂盒，其特征在于：试剂Ⅰ的pH值范围为6.5-8.5，试剂Ⅱ的pH值的范围为6.5-8.5。

10.一种制备权利要求1-9任何一项所述检测试剂盒的方法，包括（1）制备试剂Ⅰ：将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，定容得到试剂Ⅰ；（2）制备试剂Ⅱ：首先制备胰蛋白酶原-2抗体包被的胶乳颗粒溶液，并同时将其余各组分用一定量的蒸馏水和双蒸水溶解，得混合溶液；将胶乳颗粒溶液与混合溶液混合均匀，定容，得到试剂Ⅱ；（3）将试剂Ⅰ和试剂Ⅱ单独分装，密封，即得。