[发明专利]一种双组份植物激素的同时测定方法

说明书

技术领域

本发明属于化学发光技术领域，涉及一种双组份植物激素同时测定的方法，具体涉及植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）双组份的同时测定方法。 

背景技术

植物激素是一些对植物生命攸关的化学信号分子，在植物体内合成，并以极微量的浓度引发生理效应，影响和控制着植物的生长发育及其对环境的适应性。植物激素在植物体内的含量很低。近年来植物激素测定方法主要有：液相色谱-质谱法（卢巧梅, 张兰, 陈天文, 卢明华, 陈国南. 液相色谱-串联质谱分析盐胁迫下植物激素的含量变化. 中国科学 B 辑:化学 2009, 39: 785）；气相色谱-质谱法（Barkawi L S, Tam Y Y, Tillman J A, Pederson B, Calio J, Al-Amier H, Emerick M, Normanly J, Cohen J D. A high-throughput method for the quantitative analysis of indole-3-acetic acid and other auxins from plant tissue. Anal Biochem, 2008, 372: 177）；免疫传感器法（Xiao L. T, Wang R Z. Immunosensor assay: a novel method to analyze phytohormones. PGRSA Quarterly. 2006, 33:51）和化学发光法（Hun X, Mei Z H, Wang Z P, He Y H. Indole-3-acetic acid biosensor based on G-rich DNA labeled AuNPs as chemiluminescence probe coupling the DNA signal amplification. Spectrochimica Acta Part A, 2012, 95:114）等。 

但是，这些方法的各有其缺点，本发明利用金纳米粒子和磁珠为载体，以 ABEI-BSAAuNPs为纳米粒子标记物，实现了植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的双组份测定，具有方法简单、成本低、灵敏度高的优点。 

发明内容

本发明目的是提供一种同时测定双组份植物激素的方法，利用金纳米粒子和磁珠为载体，以ABEI-BSAAuNPs为纳米粒子标记物，实现植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的双组份同时测定。 

技术方案

一种双组份植物激素同时测定的方法，植物激素为吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的双组份，其特征在于用金纳米粒子和氨基化磁珠为载体，以ABEI-BSAAuNPs为纳米粒子标记物，实现植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的双组份同时测定，测定步骤如下：

（1）金纳米粒子（AuNPs）的制备，制备、储存金纳米粒子溶液所用的玻璃容器（容量瓶，棕色广口瓶，圆底烧瓶等）用王水（盐酸硝酸比例为1:3）泡洗30 min（分钟），然后用二次蒸馏水冲洗干净，烘干备用；在250 mL圆底烧瓶中加入100 mL质量浓度0.01%的氯金酸（HAuCl₄），搅拌加热至沸腾，然后快速加入1.8 mL质量浓度1%的柠檬酸三钠（Na₃C₆H₅O₇），继续加热10 min，搅15 min，冷却至室温。转移到棕色瓶中于阴凉处保存；

（2）anti-IAA抗体标记金纳米粒子（AuNPs）的制备，取2 mL的样品管，依次加入2 μL 500 mM（毫摩尔/升）的三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl）（pH为8.2），6 μL 10 mM的磷酸三氯乙酯（TCEP），6 μL 10^-4 M的巯基乙胺，室温放置30 min后加入1 mL 步骤（1）制备的AuNPs，室温下反应12 h（小时），得到巯基乙胺修饰金纳米粒子；取上述所得的巯基乙胺修饰金纳米粒子分散在含5（wt）%戊二醛的磷酸缓冲溶液中，持续搅拌2 h，用磷酸缓冲溶液离心清洗3次，再将其在磷酸缓冲溶液中，加入含10 μg anti-IAA抗体溶液，4 ℃振动孵育12 h，得到anti-IAA抗体标记金纳米粒子；