[发明专利]小鼠星形胶质细胞特异性启动子及其慢病毒载体

说明书

技术领域

本发明涉及小鼠星形胶质细胞特异性启动子，特别涉及小鼠星形胶质细胞特异性启动子慢病毒载体的构建及其应用。 

背景技术

慢病毒载体作为一种有力的基因运载工具兼具多种优点，如基因的长期持续性表达；感染谱广；能够感染分裂期与非分裂期细胞和免疫原性相对较小等。目前，慢病毒载体作为潜在的基因治疗手段，如何实现目的基因在靶组织中的特异性表达是研究的热点课题之一。然而，就解决慢病毒载体介导的基因特异性表达的方法而言，现今主要有四种：（1）使病毒颗粒与某种靶向分子或特异性抗体结合，利用靶向分子的特异性实现慢病毒感染的特异性；（2）改变病毒的包膜蛋白，使其对受体细胞的亲嗜性具有特异性；（3）引入诱导表达调控元件（如四环素诱导系统—Teton/off），使慢病毒载体上的基因表达受其他小分子的调控，再利用小分子在药物分布上的特异性实现慢病毒所带基因表达的特异性；（4）引入组织特异性启动子，使慢病毒载体中的基因在特定组织/细胞中特异性地表达^[1,2]。由上可见，从操作的简便性上讲，在慢病毒载体携带的目的基因上装置组织/细胞特异性启动子，是实现基因组织特异性表达的较为可行的一种方式。不过，这种方法也有其局限性，即只有当靶细胞能够高度特异性地表达某个基因产物时，才有可能利用该基因的启动子来作为慢病毒载体中目的基因的启动子，进而从事相关的实验研究。 

星形胶质细胞（astrocyte，astroglia）是哺乳动物大脑中数量最多的细胞，由于其在大脑和脊髓中呈星状，因而得名。星形胶质细胞在中枢神经系统中具有多种功能：（1）是大脑的主要组成成分，也是构成血脑屏障（blood-brainbarrier，BBB）的主要细胞^[3,4]；（2）能够产生并储存糖原并向神经元提供能量，也能够摄取或释放神经递质，包括谷氨酸、ATP和γ-氨基丁酸（GABA）参与神经信号的传递^[5,6]；（4）可表达通道蛋白调节微环境中的离子浓度或pH值，维持微环境的稳态^[7]；（5）能分泌多种细胞因子，调节神经元的生长和髓鞘少突胶质细胞（oligodendrocytes）的活化等^[8-10]。已有文献报道，星形胶质细胞参与了多种中 枢神经系统疾病的发病过程，如中风与脑血管疾病（stroke and cerebrovascular disease）^[11]、多发性硬化（multiple sclerosis，MS）与自身免疫性炎性紊乱（autoimmune inflammatory disorders）^[12]、老年痴呆（Alzheimer’s disease）^[13]、帕金森病（Parkinson’s disease）^[14]等。因此，利用慢病毒载体作为目的基因运载工具过表达或沉默星形胶质细胞内某些致病的靶基因将是未来研究和治疗上述中枢神经系统疾病的重要手段。