[发明专利]采用两步法制作具有血管紧张素转化酶抑制活性发酵乳的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种制备发酵乳的方法，具体涉及一种采用两步发酵法制作具有血管紧张素转化酶抑制活性发酵乳的方法。

背景技术

血管紧张素转换酶(Angiotensin Convening Enzyme，EC 3. 4. 15. 1 , ACE)是含有 Zn²⁺辅基的二肽酶。在人体内有两个平衡的系统来调节血压，分别是升压系统：肾素-血管紧张素系统(Rennin-Angiotensin system，RAS)和降压系统：激肽释放酶-激肽系统(kallikrein-kinin system，KKS)来参与血压调节。其中ACE是这两大系统中的重要组成成分，ACE具有调节血压功能，其主要作用是催化没有活性的血管紧张素I转化为血管紧张素II，血管紧张素Ⅱ是已知最强收缩血管的活性物质之一，它作用于血管平滑肌，使全身小动脉收缩，迅速引起升压效应。而在降压系统中舒缓激肽是降压物质，其前体物质是血浆蛋白的α-球蛋白中的舒缓激肽原，能在胰蛋白酶或蛇毒作用下分解，生成舒缓激肽，从而引起降血压作用。ACE在该系统中又作为肽激酶II，切除具有降压作用的舒缓激肽C末端的Phe-Arg或Ser-Pro，使之降解成为失活片断，引起血压升高。血管紧张素转换酶抑制剂正是通过抑制血管紧张素I和血管紧张素II之间转化，而且能阻止ACE降解降压物质——舒缓激肽，进而产生降血压作用。

肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统在血压调节方面是一对相互协调、相互拮抗的体系，其对血压的协调平衡作用对维持正常血压发挥非常重要作用。诱发高血压因素颇多，但是RAS、KKS两系统之间的平衡失调是诱发高血压疾病的重要因素之一。ACE在这两个系统中发挥关键作用，ACE活性增强会使升压系统和降压系统平衡失调，使得血管紧张素Ⅱ生成量增多，体系中具有降血压作用的缓激肽和前列腺素合成量则减少，这些因素的共同作用促使血压升高。抑制ACE的活性对降血压起着积极作用，因此筛选高ACE抑制活性的乳酸菌和开发具有ACE抑制活性的乳制品有着广阔的市场前景与价值。

植物乳杆菌是乳酸杆菌的一种，属于乳杆菌科乳杆菌属，是革兰氏阳性的兼性厌氧菌。它常存在于发酵蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体胃肠道的正常益生菌群，具有维持肠道内菌群平衡、提高机体免疫力、促进营养物质吸收、抑制病原菌入侵、降血压及降低胆固醇等多种生理机能。枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，它在生长繁殖过程中能够产生多种酶，如蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、植酸酶等，这些酶能有效降解食物中或者是饲料中的蛋白质、淀粉等生成氨基酸和维生素等多种对机体有益的营养因子。2008年农业部将枯草芽孢杆菌归类为益生菌的一种。单纯的乳酸菌发酵脱脂乳，其水解酶活性相对较弱，而枯草芽孢杆菌能高产蛋白水解酶，能大量水解脱脂乳中的蛋白质生成多肽或者氨基酸，为乳酸菌利用这些小分子营养物质进行生长繁殖及有效转化生成各种营养素提供物质基础。

发明内容

本发明的目的在于利用枯草芽孢杆菌水解脱脂乳中的蛋白质生成多肽或者氨基酸，再利用植物乳杆菌产生血管紧张素转化酶抑制活性的短肽。

本发明采用两步法制作具有血管紧张素转化酶抑制活性发酵乳的方法是：采用高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌两步法发酵脱脂乳，枯包括草芽孢杆菌和植物乳杆菌种子液的制备和扩大培养；发酵乳制备；枯草芽孢杆菌发酵；植物乳杆菌发酵，具体步骤为：

步骤一，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌种子液的制备和扩大培养：

将保存的枯草芽孢杆菌菌株从-80℃中取出解冻后，取60 μL接种至5 mL灭菌营养肉汤培养基中，170 rpm，37℃振荡培养48 h，

将枯草芽孢杆菌培养48 h后，接种，取1.5 mL菌液接种至50 mL营养肉汤培养基中，170 rpm 37 ℃振荡培养48 h，

将保存的乳酸菌菌株从-80℃中取出解冻后，取30 μL接种至5 mL灭菌MRS肉汤培养基中，置于37℃恒温培养箱，静置培养48 h，

乳酸菌培养48 h后，接种，取1.0 mL菌液接种至50 mL灭菌MRS肉汤培养基中，37℃静置培养36 h；

步骤二，发酵乳的制备：

11g脱脂乳加入100mL蒸馏水溶解混匀，105℃高压灭菌20min，将灭菌好的脱脂乳冷却备用；

步骤三，枯草芽孢杆菌发酵：

将步骤一的枯草芽孢杆菌接种于步骤二的脱脂乳中，170 rpm，37℃振荡培养48h；

步骤四，植物乳杆菌发酵：