[发明专利]一种白及高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药材指纹图谱的建立方法，特别是白及高效液相色谱指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的白及标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。

背景技术

白及（Bletilla striata(Thunb.)Reichb.F.）为兰科植物，块茎干燥，性微寒，味苦、甘、涩，归肺、胃、肝经；有收敛止血，消肿生肌的功效，用于咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂。《中国药典》2010年版对白及饮片的质量控制只限于原植物品种、药材性状和简单的理化鉴别，缺乏一套行之有效的内在质量控制方法。虽然陆续有文献对白及中化学成分进行含量测定，包括肉桂酸、2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲、2,4-二甲氧基-3,7-二羟基菲、总酚、总多糖，但是对于白及这样有效成分类型多、组分复杂的中药材，仅测定某类成分的含量，难以客观、有效地评价或控制药材的质量。

中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。色谱指纹图谱技术作为一种多组分复杂样品的有效质量控制方法，能够反映出待测样品的整体性、特征性，目前已被广泛用于中草药及其各种制剂的质量控制。目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，由于高效液相色谱（HPLC）具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，且中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。但目前还未见有利用高效液相色谱（HPLC）方法对白及指纹图谱进行测试和分析的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种白及高效液相色谱指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的白及标准指纹图谱。该方法及图谱提供了一种能有效控制白及质量的方法，为白及的质量控制提供参考。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

（1）供试品溶液的制备：精密称定白及粉末，过四号60目筛，得到白及粉末1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，静置0min，超声提取30min，超声的功率为280W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足失去的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液进行色谱测定。

（2）高效液相HPLC色谱分析条件：

色谱柱：大连依利特公司Hypersil ODS₂柱（4.6mm×250mm，5μm）；

柱温：40℃；

检测波长：277nm；

流动相：乙腈-水，梯度洗脱；

流速：1mL/min；

梯度洗脱程序：时间梯度为

。

白及HPLC指纹图谱的建立方法所得的标准指纹图谱共有色谱峰13个，其保留时间分别为2.024min、5.928min、10.765min、16.133min、17.279min、20.999min、23.232min、24.678min、25.924min、28.287min、30.366min、32.529min、34.291min。

与现有技术相比，本发明提供的白及HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱可作为一种能有效控制白及质量的方法，并为白及的质量控制提供参考。本发明方法供试品制作简便，色谱条件容易实现，方法的稳定性和重现性好。

附图说明

图1为不同溶剂提取白及主要成分色谱图比较；

图2为不同比例溶剂提取白及主要成分色谱图比较；

图3为加热回流与超声波提取白及主要成分色谱图比较；

图4为不同超声时间提取白及主要成分色谱图比较；

图5为不同静置时间对白及主要成分提取效率的影响图；

图6为超声提取次数对提取白及主要成分影响色谱图比较；

图7为不同超声功率对提取白及主要成分影响色谱图比较；

图8为不同流动相洗脱比较图；

图9为选用的梯度洗脱程序图谱；

图10为PAD检测器全波长扫描图；

图11为不同流速色谱图比较；

图12为不同柱温比较图；

图13为空白溶剂（甲醇）图谱；

图14为供试品仪器精密度色谱图；

图15为供试品重复性色谱图；