[发明专利]结核分枝杆菌IgM特异性蛋白Rv2915c及其用途

说明书

技术领域

本发明属于医学技术领域，具体涉及结核分枝杆菌IgM特异性蛋白Rv2915c及其用途。

背景技术

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染引起的结核病是目前世界上死亡率最高的慢性传染病，也是危害仅次于艾滋病的全球第二大传染性疾病，目前已发展成为全球性的疫情。全球每年新增9百万病例，造成2百万人死亡。HIV与结核的共感染成为AIDS患者死亡的第一因素，而耐多药结核病（MDR-TB）和广泛耐药结核病(XDR-TB)的出现降低了结核的治愈率，耐多药结核病（MDR-TB）治愈率较低，通常从约50％至70％不等。结核病疫情引起了世界范围内的广泛关注与重视，但目前在结核病预防上唯一使用的疫苗BCG仅仅在预防儿童结核病有作用，对于成人的肺结核的保护功效上却具有不确定性，而在结核病早期血清学诊断中存在着准确率较低、特异度不够等的缺陷，不能很好满足临床的需要。有待于寻找新的诊断抗原、新的疫苗研制策略。

抗原表位是抗原分子中的主要功能单位，能有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫，是诊断和疫苗研究的理论基础。探索抗原表位的识别，有助于发展新疫苗和诊断方法。IgM是免疫中机体初次免疫应答时最初产生的抗体，在早期感染中发挥重要的免疫防御作用。以前的研究发现IgM对于分枝菌的38-kDa、16-kDa和6-kDa抗原的敏感性不高，却具有很好的特异性。IgM与抗原结合后发生构象变化，能激活补体的经典途径。同时，IgM在体液免疫中对于B细胞的活化和成熟具有重要作用。而在免疫反应的早期，B细胞或单核细胞上表达的Fcα/μR能摄取lgM免疫复合物，并提呈给T细胞，引起辅助性T细胞的活化。所以，基于IgM抗原以及IgM抗体在结核免疫中有重要的作用和功能研究结核分枝杆菌IgM特异性抗原表位，有助于发展新疫苗和新的诊断方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为结核病的检测提供一种新选择。

本发明的技术方案是结核分枝杆菌蛋白Rv2915c，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步，结核分枝杆菌蛋白Rv2915c的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了所述结核分枝杆菌蛋白Rv2915c在诊断结核病中的用途。

本发明还提供了结核病诊断试剂，其主要活性成分为结核分枝杆菌蛋白Rv2915c。

本发明还提供了结核病诊断试剂盒，主要包括结核分枝杆菌蛋白Rv2915c。

本发明的有益效果：

本发明首次对结核分枝杆菌中Rv2915c基因进行了克隆表达，纯化出重组蛋白，并证明其具有抗原特性，为结核病的血清诊断提供了新的标记物。发现其具有与PPD、CFP10相似的敏感性和特异性，可作为结核病的诊断试剂。Rv2915c蛋白可通过基因重组技术制备，因而便于大批量生产和诊断试剂盒的研制。本发明为结核病的诊断提供了新的选择。

附图说明

图1.噬菌体展示库消减筛选结核特异性IgM抗原Rv2915c流程。

图2.本发明所述Rv2915c蛋白诱导情况SDS-PAGE电泳图，示重组菌株被成功诱导出Rv2915c蛋白。图中泳道1为未诱导重组菌株蛋白表达情况，泳道2为诱导后重组菌株表达情况，泳道3为空载菌株蛋白表达情况。

图3.Rv2915c重组蛋白经高亲和性Ni-Charged Resin柱纯化后Western bloting检测图，图中显示纯化的重组蛋白带有组氨酸标签（His-tag）为构建的目的蛋白。图中泳道1为纯化后重组蛋白，泳道2为蛋白溶解液Medium作为阴性对照。

图4.Rv2915c对于结核病不同类群血清（Category1：初治病人；Category2：复治病人）的反应。纵坐标表示490nm吸光度值。图中明显可以看出对比已知诊断抗原CFP10，Rv2915c对于结核病不同类群的血清学免疫反应明显强于CFP10，差异极显著（***）。

具体实施方式

本发明的技术方案是结核分枝杆菌蛋白Rv2915c，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步，结核分枝杆菌蛋白Rv2915c的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了所述结核分枝杆菌蛋白Rv2915c在诊断结核病中的用途。