[发明专利]一种蛋白酶高产米曲霉及其产生的蛋白酶和应用

权利要求书

1.一种蛋白酶高产米曲霉（Aspergillus oryzae），于2013年5月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7586，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述的米曲霉，其特征在于高产蛋白酶。

3.权利要求1所述的米曲霉产生的蛋白酶，其特征在于所述蛋白酶能高效水解鸡肉蛋白产生生产小肽和鲜味氨基酸。

4.权利要求3所述的蛋白酶，其特征在于对-Glu-Ala-和-Pro-Lys-肽键有非常强的选择性。

5.权利要求3所述的蛋白酶，其特征在于水解鸡肉蛋白的最适作用条件，pH为7.0，温度为45℃，底物浓度为700U/g，底物水解3h可达最大水解度18.9%。

6.权利要求3或4所述的蛋白酶的纯化方法，其特征在于：所述纯化方法包括以下步骤：

（1）将发酵好的米曲霉培养物加入适量灭菌生理盐水，振荡过滤，滤液为粗酶液；分别采用40%、80%饱和度硫酸铵去除粗酶液中的杂蛋白及初步沉淀蛋白酶；

（2）将所述步骤（1）的沉淀蛋白酶脱盐后上样于DEAE-Sepharose FF柱，充分洗脱后，NaCl溶液线性梯度洗脱，收集电导为9.04-13.1cm/ms的酶活组分；

（3）将所述步骤（2）收集的酶活组分上样于Phenyl-Sepharose HP柱，Tris-HCl缓冲液线性梯度洗脱，收集酶活组分并脱盐；

（4）将所述步骤（3）收集的酶活组分加样于Sepharose-G75凝胶柱，Tris-HCl缓冲液洗脱，收集酶活组分。