[发明专利]银金核-卫星结构表面等离子体共振探针及其制备方法

权利要求书

1.一种银金核-卫星结构表面等离子体共振探针，其特征在于，该表面等离子体共振探针中的纳米银立方与金纳米粒子形成银金“核-卫星”结构，增强了纳米银立方的表面等离子体共振信号；其结构是：纳米银立方固定在预处理过的玻璃表面，识别单链DNA通过功能基团连接到纳米银立方表面，利用DNA与miRNA的碱基互补配对作用将miRNA连接到单链DNA修饰过的纳米银立方表面，miRNA的另一端通过功能基团连接金纳米粒子，形成银金“核-卫星”结构表面等离子体共振探针。

2.根据权利要求1所述的银金核-卫星结构表面等离子体共振探针，其特征在于：该表面等离子体共振探针粒径在40~70 nm之间，散射光谱峰位于450~650 nm。

3.一种如权利要求1所述的银金核-卫星结构表面等离子体共振探针的制备方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：

1）纳米银立方的制备

首先，在室温下将葡萄糖溶液3~8 mM和十六烷基三甲基溴化铵溶液50~80 mM依次快速加入到定量的银氨溶液10~15 mM中，其中银氨溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液浓度比为10: 1；然后，置于反应釜中在90~120℃下反应10~12 h；最后，取出反应后溶液离心并超声波辐射2~5 min后制得纳米银立方溶液；

2）纳米银立方玻璃基底的制备

首先，将玻璃基底依次置于洗洁精溶液、丙酮、无水乙醇、超纯水中各超声清洗1~2 h；然后，取出玻璃基底用氮气吹干后浸于步骤1）中制备的纳米银立方溶液中，浸泡2~5 min后取出用超纯水冲洗并用氮气吹干；

3）单链DNA分子的固定

首先，将步骤2）中制备的纳米银立方玻璃基底置于紫外-臭氧清洗机中照射20~30 min，取出后用超纯水冲洗并用氮气吹干；然后将吹干的玻璃基底浸于1 uM 的单链DNA溶液中经摇床25℃摇匀10~12 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用氮气吹干，置于1 mM的6-巯基己-1-醇溶液中孵化2~3 h后用超纯水冲洗并用氮气吹干；

4）单链DNA与RNA分子的杂交

首先，将miRNA-21和与之对应的一端连巯基的单碱基错配miRNA按miRNA与miRNA-21 摩尔浓度比为10^-2:1~10²:1混合；然后将步骤3）中制备的单链DNA分子固定后的纳米银立方玻璃基底浸泡于此混合溶液中经摇床25℃摇匀2~3 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用低流氮气吹干；

5）金纳米颗粒的制备

首先，取100~200 mM十六烷基三甲基溴化铵溶液和5~20 mM HAuCl₄溶液加入到烧杯中不断搅拌，在冰水浴的条件下向其中加入10~50 mM NaBH₄溶液；然后，在27℃恒温水浴中静置1~5 h，制得金纳米种子溶液，金纳米种子直径3~5 nm；最后，取100~500 mM 十六烷基三甲基溴化铵溶液，加入0.1~0.9 mM HAuCl₄溶液，再加入100~200 mM 抗坏血酸溶液不断搅拌，向其中加入上述步骤制备的金纳米种子溶液，静置1~5 h后经过离心并超声辐射后制得金纳米粒子的直径为8~12 nm；

6）金纳米颗粒的修饰

将步骤4）修饰好的玻璃基底浸于步骤5）中制备的金纳米粒子溶液中，金纳米粒子直径8~12 nm，浸泡10~60 min后取出用超纯水冲洗并用低流氮气吹干。